本文選題：冬凌草甲素 + 阿爾茨海默病��； 參考：《南京中醫(yī)藥大學》2016年博士論文

【摘要】：研究背景：阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是一種致死性的中樞神經系統(tǒng)變性疾病,是導致老年癡呆的最主要原因,其主要臨床表現(xiàn)為進行性學習記憶損傷和認知功能障礙,典型病理特征包括細胞外p-淀粉樣蛋白(Amyloid-β, Aβ)沉積成老年斑以及細胞內過度磷酸化的Tau蛋白形成神經纖維纏結(Neurofibrillary Tangles, NFTs)。目前認為Aβ級聯(lián)假說是AD最重要的發(fā)病機制,而越來越多的研究發(fā)現(xiàn)Aβ誘導的突觸丟失和神經炎癥在AD的進程中發(fā)揮重要作用。目的：(1)觀察冬凌草甲素(Oridonin, Ori)對AD模型小鼠認知功能障礙的影響；(2)體內外研究Ori對Aβ1-42誘導的突觸丟失的影響及其機制；(3)體內研究Ori對Aβ1-42誘導的神經炎癥的影響及其機制。方法：(1)以立體定位法將Aβ1-42注射至C57BL/6 (B6)小鼠雙側海馬內以制備AD小鼠模型,Aβ1-42處理原代培養(yǎng)的小鼠皮層神經元為體外AD模型,體內外均隨機建立AD模型組及Ori治療組。利用水迷宮檢測Ori能否改善AD模型小鼠認知功能障礙。(2)第一部分利用Western blot及免疫熒光分析Ori對體內及體外AD模型中突觸標記物PSD-95和synaptophysin的影響,MTT檢測Ori處理AD模型小鼠突觸小體活性的變化,Golgi染色觀察小鼠海馬內樹突形態(tài)的變化,Western blot及免疫熒光檢測Ori能否激活海馬內BDNF/TrkB/CREB信號通路；(3)第二部分利用RT-PCR和Western blot檢測Ori處理的AD模型小鼠海馬內炎癥因子mRNA和蛋白表達水平,免疫熒光分析小膠質細胞和星型膠質細胞的激活狀況,Western blot檢測線粒體的損傷情況以及Ori能否抑制NF-κB通路的激活。結果：(1)行為學結果顯示Ori顯著降低AD模型小鼠逃避潛伏期和上臺前搜索距離,并增加其穿越平臺的次數；Western blot及免疫熒光結果顯示Ori上調體內外AD模型中PSD-95和synaptophysin的表達；Golgi染色結果顯示Ori增加AD小鼠海馬內樹突長度及分叉,并增加樹突棘的數量；此外,Ori上調AD小鼠突觸小體內PSD-95和synaptophysin的表達,MTT結果顯示Ori可提高突觸小體活性；Western blot及免疫熒光結果顯示Ori可激活海馬內BDNF/TrkB/CREB信號通路。(2)RT-PCR及Western blot結果顯示Ori可抑制AD模型小鼠海馬內炎癥因子的表達；免疫熒光顯示Ori可抑制海馬內小膠質細胞和星型膠質細胞的激活；Western blot結果顯示Ori抑制AD小鼠海馬內NF-κB通路的激活同時改善線粒體損傷。結論：Ori明顯改善AD小鼠認知功能障礙,其作用機制可能為Ori改善AD小鼠海馬內的突觸丟失和緩解AD小鼠海馬內的神經炎癥反應,提示Ori可作為治療AD的潛在藥物。
[Abstract]:Background: Alzheimer's disease (ADD) is a fatal degeneration of the central nervous system (CNS) and is the main cause of Alzheimer's disease (AD). The main clinical manifestations of AD are progressive learning and memory impairment and cognitive impairment. Typical pathological features include the deposition of extracellular pamyloid- 尾 (A 尾) into senile plaques and the formation of neurofibrillary tangles (NFTs) by hyperphosphorylation of Tau proteins in cells. The A 尾 cascade hypothesis is considered to be the most important pathogenesis of AD, and more and more studies have found that A 尾 -induced synaptic loss and neuroinflammation play an important role in the progression of AD. Objective: to observe the effect of Oridonin (Ori2) on cognitive dysfunction in AD model mice in vivo and in vitro to study the effect of Ori on synaptic loss induced by A 尾 1-42 and its mechanism in vivo) to study the effect of Ori on neuroinflammation induced by A 尾 1-42 and its mechanism in vivo. Methods A 尾 1-42 was injected into the hippocampus of C57BL/6 B6 mice by stereotaxic method. The primary cultured cortical neurons of AD mice were treated with A 尾 1-42 as AD model in vitro. The AD model group and Ori treatment group were randomly established in vivo and in vitro. Using water maze to detect whether Ori can improve cognitive dysfunction in AD model mice. Part I: using Western blot and immunofluorescence to analyze the effect of Ori on PSD-95 and synaptophysin in AD model in vivo and in vitro. Ori was used to detect the treatment of AD model with Ori. Changes of synaptosome activity in mice by Golgi staining the morphological changes of dendrites in the hippocampus of mice were observed. Western blot and immunofluorescence were used to detect whether Ori could activate the BDNF/TrkB/CREB signaling pathway in the hippocampus. Part 2: the AD model treated with Ori was detected by RT-PCR and Western blot. The expression of inflammatory factor mRNA and protein in hippocampus of mice, The activation of microglia and astrocytes was analyzed by immunofluorescence. The damage of mitochondria was detected by Western blot and whether Ori inhibited the activation of NF- 魏 B pathway. Results (1) Behavioral results showed that Ori significantly decreased the escape latency and search distance before entering the stage in AD mice. The results showed that Ori up-regulated the expression of PSD-95 and synaptophysin in AD model in vivo and in vitro. The results showed that Ori increased the length and bifurcation of dendrites in hippocampus and increased the number of dendritic spine in AD mice. In addition, Ori upregulated the expression of PSD-95 and synaptophysin in synaptosomes of AD mice. The results showed that Ori could increase the activity of synaptosomes. Western blot and immunofluorescence showed that Ori could activate BDNF/TrkB/CREB signaling pathway in hippocampus. RT-PCR and Western blot showed that Ori could inhibit AD. The expression of inflammatory factors in hippocampus of model mice; Immunofluorescence showed that Ori could inhibit the activation of microglia and astrocytes in hippocampus. Western blot showed that Ori inhibited the activation of NF- 魏 B pathway in hippocampus of AD mice and improved mitochondrial damage. Conclusion Ori can improve cognitive dysfunction in AD mice, and the mechanism may be that Ori can ameliorate synaptic loss in hippocampus and relieve neuritis in AD mice, suggesting that Ori may be a potential drug for AD.
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R285.5;R-332

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本文編號：1816054