本文選題：腦卒中 + 腦出血�。� 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:1,獲得MicroRNA-132不同表達(dá)水平的小鼠。2,建立腦出血(intracerebral hemorrhage,ICH)模型。3,觀察不同組別小鼠腦出血后神經(jīng)功能行為學(xué)改變以及存活率。4,探究MicroRNA-132對腦出血后小鼠腦組織水腫、血腫體積及血腦屏障通透性的影響。5,評價(jià)不同組別小鼠腦組織中乙酰膽堿酯酶(AChE)含量。6,觀察腦出血后小鼠腦組織中小膠質(zhì)細(xì)胞浸潤及神經(jīng)元凋亡。7,探究腦出血后MiR-132對小鼠腦組織中IL-6,IL-1β以及TNF-α等炎性細(xì)胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄水平的變化的影響。8,通過探討不同MiR-132表達(dá)水平的小鼠腦出血后神經(jīng)功能學(xué)、神經(jīng)病理學(xué)改變以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫炎癥反應(yīng)的變化,進(jìn)一步探究MiR-132在小鼠腦出血模型中的作用及機(jī)制。方法:C57BL/6J雄性小鼠隨機(jī)分為病毒對照組(LV-control)、MiR-132高表達(dá)組(LV-miR-132)、MiR-132低表達(dá)組(LV-anti-miR-132)并分別注射相應(yīng)慢病毒,每組64只小鼠。2周后,三組小鼠接受自體血基底節(jié)注射獲得腦出血模型。1,應(yīng)用基底節(jié)原位注射方法分別對各組小鼠進(jìn)行慢病毒注射,2周后應(yīng)用免疫熒光染色及實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-q PCR)驗(yàn)證各組別MiR-132的表達(dá)水平不同。2,采用內(nèi)眥取血及基底節(jié)注射方法獲得小鼠腦出血模型。3,分別用改良的神經(jīng)功能評分、轉(zhuǎn)角實(shí)驗(yàn)及前肢放置實(shí)驗(yàn)評價(jià)小鼠腦出血后1天及3天神經(jīng)行為學(xué)改變及存活率。4,于小鼠腦出血后3天獲得小鼠腦組織并稱量其濕重,烘干后稱量其干重從而獲得腦組織含水量,通過甲醛固定及腦組織切片比較出血后3天腦組織血腫體積變化,5,股靜脈注射伊文思藍(lán)并計(jì)算不同組別腦組織中伊文思藍(lán)的含量并通過蛋白印記方法評價(jià)緊密連接蛋白表達(dá)水平從而比較各組小鼠血腦屏障破壞情況。6,通過組織免疫熒光染色比較各組小鼠腦組織中小膠質(zhì)細(xì)胞的浸潤及神經(jīng)元凋亡。7,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-q PCR)方法檢測不同組別腦出血小鼠中樞腦組織中IL-6,IL-1β以及TNF-α等炎性細(xì)胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄水平。8,通過蛋白印跡評價(jià)不同組別小鼠中樞腦組織中乙酰膽堿酯酶的表達(dá)水平。從而探索miR-132在腦出血模型中發(fā)揮的作用及可能的機(jī)制。結(jié)果:1,給三組小鼠分別注射不同慢病毒2周后,通過免疫熒光染色及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測證實(shí)不同組別小鼠miR-132表達(dá)水平不同。2,采用小鼠內(nèi)眥靜脈取血并將其注射至右側(cè)基底節(jié)成功建立腦出血模型。3,神經(jīng)功能學(xué)評分結(jié)果顯示LV-miR-132組小鼠腦出血后1天及3天神經(jīng)功能缺損均較LV-control組明顯減輕(P0.05),而LV-anti-miR-132組神經(jīng)功能缺損要重于對照組(P0.05),miR-132表達(dá)水平影響小鼠腦出血后存活率,LV-miR-132組較LV-control組存活率提高,LV-anti-miR-132組較LV-control組存活率降低,但三組之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4,通過計(jì)算小鼠出血后3天腦組織含水量來評價(jià)腦水腫,結(jié)果顯示腦出血側(cè)腦組織含水量LV-miR-132組較LV-control組明顯減少(P0.01),但對側(cè)腦組織及小腦的含水量兩組之間并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,miR-132的低表達(dá)組較對照組腦水腫變化并不顯著。對3天后腦血腫變化情況的統(tǒng)計(jì)分析顯示miR-132的過表達(dá)可減小血腫體積但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5,對各組小鼠股靜脈注射伊文思藍(lán)(EB))后比較其在各組小鼠腦組織中外滲的情況并計(jì)算其在腦組織中的含量,結(jié)果顯示LV-miR-132組較LV-control組EB的含量明顯減少(P0.05),LV-anti-miR-132組較LV-control組EB含量顯著增多(P0.05)。免疫印跡法分析緊密連接蛋白claudin-5 and ZO-1的表達(dá)水平各組之間也有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01),以上結(jié)果證實(shí)miR-132的高表達(dá)會(huì)減輕血腦屏障的破壞。6,免疫熒光染色結(jié)果顯示各組小鼠腦組織中活化的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目不同,LV-miR-132組與LV-control組相比小膠質(zhì)細(xì)胞明顯減少(P0.01),而miR-132低表達(dá)組小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增加(P0.05),免疫印跡法進(jìn)一步印證了這一結(jié)論,同時(shí),通過免疫熒光法對凋亡細(xì)胞進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析得出結(jié)論miR-132的過表達(dá)可減少小鼠出血后腦組織中的細(xì)胞凋亡(P0.01),而miR-132的低表達(dá)則會(huì)加劇細(xì)胞的凋亡(P0.01)。7,RT-q PCR顯示miR-132的表達(dá)水平會(huì)影響小鼠腦出血后3天腦組織中IL-6,IL-1β以及TNF-α等炎性細(xì)胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄水平,其中LV-miR-132組較LV-control組三種炎性細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄均明顯減少(P0.01),LV-anti-miR-132組較LV-control組炎性細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄增多(P0.01)。8,免疫印跡法分析小鼠腦組織中乙酰膽堿酯酶(AChE)含量,結(jié)果發(fā)現(xiàn)腦出血后3天各組間AChE表達(dá)水平不同,miR-132過表達(dá)組其含量明顯減少(P0.01),相反miR-132低表達(dá)組較對照組其含量明顯增加(P0.01),進(jìn)一步分析認(rèn)為miR-132通過影響AChE的表達(dá)從而發(fā)揮其作用。結(jié)論:1,成功獲得三組miR-132表達(dá)水平不同的小鼠,其中LV-miR-132組表達(dá)水平上調(diào),LV-anti-miR-132組miR-132的表達(dá)較對照組明顯減少。2,小鼠腦出血后表現(xiàn)為神經(jīng)功能缺損,miR-132過表達(dá)可明顯改善小鼠腦出血后1天及3天神經(jīng)功能缺損癥狀,而抑制miR-132的表達(dá)則會(huì)加重其功能缺損癥狀。同時(shí)對小鼠腦出血后存活率分析發(fā)現(xiàn)miR-132亦可提高存活率但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3,腦出血后表現(xiàn)為腦組織水腫,miR-132過表達(dá)可減少出血側(cè)腦組織含水量即水腫程度,但并不影響對側(cè)腦組織及小腦含水量,miR-132的低表達(dá)則會(huì)加重腦水腫,而對各組小鼠腦組織血腫體積的分析發(fā)現(xiàn),miR-132并不改變血腫程度。4,腦出血后最直接及最突出的表現(xiàn)為血腦屏障的改變進(jìn)一步導(dǎo)致腦水腫等的發(fā)生,觀察伊文思藍(lán)在腦組織出血側(cè)滲出情況及緊密連接蛋白含量測定可以評價(jià)腦組織血腦屏障破壞程度,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)小鼠腦出血后3天,miR-132的過表達(dá)可減少伊文思藍(lán)滲出,其在腦組織中的含量明顯減少,同時(shí)緊密連接蛋白的含量明顯增多,以上均說明miR-132可減輕血腦屏障的破壞程度。5,活化的小膠質(zhì)細(xì)胞參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)腦組織的炎癥過程,炎癥反應(yīng)可進(jìn)一步加重腦出血后細(xì)胞的凋亡,通過免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)miR-132的過表達(dá)可明顯減少活化的小膠質(zhì)細(xì)胞,同時(shí)也減少細(xì)胞的凋亡。而抑制miR-132的表達(dá)則會(huì)加劇這一過程。6,MiR-132有可能通過減少腦中相關(guān)促炎因子的基因表達(dá)來發(fā)揮其在出血的腦組織中的作用,RT-q PCR證實(shí)相關(guān)因子在高表達(dá)miR-132組的小鼠腦組織中明顯減少,進(jìn)一步印證了其抗炎作用。7,乙酰膽堿酯酶(AChE)是miR-132的作用靶點(diǎn),而乙酰膽堿的抗炎作用已經(jīng)被證實(shí),免疫印跡法證實(shí)miR-132的過表達(dá)組小鼠出血腦組織中AChE的含量減少,進(jìn)一步說明miR-132是通過乙酰膽堿的抗炎通路發(fā)揮其作用。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of MiR - 132 on brain edema , hematoma volume and immune inflammatory response in mice after intracerebral hemorrhage . The results showed that the expression of miR - 132 decreased significantly compared with LV - control group ( P0.05 ) . The results showed that the low expression level of miR - 132 decreased significantly ( P0.05 ) , but the expression level of LV - anti - miR - 132 was significantly decreased compared with LV - control group ( P0.05 ) . It was found that miR - 132 can reduce the degree of damage of brain barrier by reducing the expression of miR - 132 in brain tissue .

【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R743.34;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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1 Yu-Jing Li;Guo-Qiang Chang;Yuanchu Liu;Ye Gong;Chunsheng Yang;Kristofer Wood;Fu-Dong Shi;Ying Fu;Yaping Yan;;Fingolimod alters inflammatory mediators and vascular permeability in intracerebral hemorrhage[J];Neuroscience Bulletin;2015年06期

2 韓寧;丁素菊;吳濤;朱幼麗;;大鼠腦出血模型中神經(jīng)細(xì)胞凋亡與自由基水平的相關(guān)性(英文)[J];Neuroscience Bulletin;2008年06期

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本文編號(hào)：1780652