發(fā)布時(shí)間：2018-04-17 09:14

  本文選題：Neuritin基因 + 慢病毒高表達(dá)系統(tǒng)��； 參考：《江蘇醫(yī)藥》2013年09期

【摘要】：目的構(gòu)建neuritin基因的高表達(dá)系統(tǒng),觀察其轉(zhuǎn)染雪旺細(xì)胞后neuritin的表達(dá)。方法根據(jù)大鼠neuritin mRNA序列體外合成編碼序列(CDS區(qū)),構(gòu)建到pGH載體,與酶切后的GV208-綠色熒光蛋白(GFP)慢病毒載體片段進(jìn)行連接、轉(zhuǎn)化、酶切及測序鑒定重組克隆。提取陽性克隆,轉(zhuǎn)染入293T細(xì)胞,包裝成慢病毒,以此感染大鼠雪旺細(xì)胞。將雪旺細(xì)胞分為三組:空白對照組(A組)、無意義干擾組(B組)、高表達(dá)組(C組)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞neuritin的表達(dá)。結(jié)果大鼠neuritin正確插入慢病毒載體,C組neuritin mRNA水平顯著高于A組、B組(P0.01)。檢測到neuritin蛋白與GFP的融合蛋白。結(jié)論成功構(gòu)建neuritin慢病毒高表達(dá)系統(tǒng);其轉(zhuǎn)染的雪旺細(xì)胞neuritin表達(dá)升高。
[Abstract]:Objective to construct a high expression system of neuritin gene and observe the expression of neuritin in Schwann cells.Methods according to the rat neuritin mRNA sequence, the pGH vector was constructed and ligated with the GV208-green fluorescent protein (GFP) lentivirus vector. The recombinant clones were identified by restriction endonuclease digestion and sequencing.Positive clones were extracted, transfected into 293T cells and packaged into lentivirus to infect Schwann cells in rats.Schwann cells were divided into three groups: blank control group (group A), meaningless interference group (group B) and high expression group (group C).The expression of neuritin was detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blot assay.Results the level of neuritin mRNA in group C was significantly higher than that in group A (P 0.01).The fusion protein of neuritin and GFP was detected.Conclusion the high expression system of neuritin lentivirus was successfully constructed, and the neuritin expression in Schwann cells transfected with lentivirus was increased.
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌病科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81070655) 江蘇省科技廳基礎(chǔ)研究計(jì)劃(自然科學(xué)基金)(BK2009441)
【分類號(hào)】：R363

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