本文選題：Nrf2　切入點(diǎn)：Mkp1　出處：《浙江大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：轉(zhuǎn)錄因子紅細(xì)胞系-2 p45相關(guān)因子-2 (NF-E2 p45-related Factor 2, Nrf2)通過上調(diào)Ⅱ相解毒酶和抗氧化蛋白,介導(dǎo)抗氧化反應(yīng),使細(xì)胞免受活性氧(ROS)、親電子化合物、細(xì)菌等外來物質(zhì)的損害；Mkpl (DUSP1)通過絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)也在應(yīng)激反應(yīng)和炎癥反應(yīng)中起關(guān)鍵調(diào)控作用。但這兩個(gè)信號(hào)通路是否相關(guān),目前尚無報(bào)道。為了明確Nrf2和Mkpl之間的調(diào)控作用及機(jī)制,以及這種相互作用在整體動(dòng)物體內(nèi)的生物學(xué)意義,本課題利用WT, Nrf2-/-小鼠和Mkpl-/-三種不同基因型動(dòng)物,分別在親電子化合物叔丁基羥基茴香醚(Butylated hydroxyanisole, BHA),萊菔硫烷(Sulforaphane, SFN)處理下和脂多糖(Lipopolysaccharides, LPS)誘導(dǎo)炎癥病理狀態(tài)下用Taqman, Western blot,免疫組化和Co-IP等方法,從分子水平,細(xì)胞水平,組織學(xué)水平和整體動(dòng)物水平,探討了Mkpl與Nrf2/ARE信號(hào)通路關(guān)鍵分子的關(guān)系。本課題一方面用200 mg/kg BHA或25mg/kg SFN處理WT, Nrf2-/-小鼠和Mkp1-/-小鼠,從mRNA水平,蛋白水平和組織學(xué)方面研究發(fā)現(xiàn)小鼠肝臟和小腸中,BHA或SFN能通過激活Nrf2,增加下游基因Nqo1, Gstml的表達(dá),提高GSH水平。組織學(xué)上Nrf2和Nqo1,主要分布于小鼠肝臟的中央靜脈周圍和小腸絨毛。BHA或SFN能誘導(dǎo)WT小鼠肝臟中Nrf2入核增加,使Mkpl升高,進(jìn)一步促進(jìn)Nrf2下游Nqo1, Gstml, Akrlb8和Hol的表達(dá),而Mkpl-/-小鼠體內(nèi)BHA或SFN對(duì)Nrf2/ARE信號(hào)通路的誘導(dǎo)作用明顯減弱。說明Mkp1對(duì)BHA或SFN誘導(dǎo)Nrf2/ARE信號(hào)通路有調(diào)控作用。另外,Nrf2-/-小鼠體內(nèi)Mkp1的表達(dá)也較WT鼠顯著降低,說明Nrf2對(duì)Mkp1也具有調(diào)節(jié)作用。另一方面,我們用LPS分別處理Raw264.7細(xì)胞株和WT, Nrf2-/-和Mkp1-/--三種不同基因型小鼠,從mRNA水平,蛋白水平和組織學(xué)方面檢測,發(fā)現(xiàn)Mkp1能與Nrf2結(jié)合,在蛋白水平對(duì)Nrf2/ARE信號(hào)通路調(diào)控,并影響炎癥因子的產(chǎn)生。本課題從細(xì)胞水平和整體水平明確了Mkp1和Nrf2相互作用,發(fā)現(xiàn)了Mkp1-Nrf2是氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)中重要的信號(hào)通路。
[Abstract]:Transcription factor RBC cell line -2 p45 related factor 2 NF-E2 p45-related Factor 2 (Nrf2) mediated antioxidant reaction by up-regulating phase 鈪，

本文編號(hào)：1696462