本文選題：IL-　切入點：原核表達純化　出處：《現代免疫學》2013年06期

【摘要】：使用大腸桿菌BL21(DE3)重組表達可溶性人IL-6并對其進行純化和活性鑒定。以人激活T細胞總RNA為模板,逆轉錄PCR擴增人IL-6的基因片段并將其克隆到原核表達載體pET32a(+)中,重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3),優(yōu)化表達條件獲得可溶性表達目的蛋白。細菌裂解上清經鎳金屬螯和層析純化,SDS-PAGE鑒定其分子量大小,western blot鑒定其免疫原性,并通過IL-6依賴的細胞株T1165分析重組蛋白的活性。成功構建了pET32a(+)/IL-6表達載體,并獲得了可溶性表達的重組人IL-6蛋白。SDS-PAGE顯示,其分子量約為21kD,可被抗IL-6抗體特異性識別,并且該重組蛋白可刺激IL-6依賴的細胞株T1165增殖,比活性與標準品一致,約為1×106 U/mg。本實驗獲得了可溶性高表達的重組人IL-6蛋白,為進一步研究人IL-6奠定了基礎。
[Abstract]:The soluble human IL-6 was expressed and purified by E. coli BL21DE3. The total RNA of human activated T cells was used as template. The gene fragment of human IL-6 was amplified by reverse transcription PCR and cloned into the prokaryotic expression vector pET32a (). The recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli BL21DE-3, and the soluble expression protein was obtained by optimizing the expression conditions. The bacterial lytic supernatant was purified by nickel metal chelate and chromatography. Its molecular weight was identified by western blot and its immunogenicity was identified. The activity of recombinant protein was analyzed by IL-6 dependent cell line T1165. The expression vector of pET32awas successfully constructed, and the soluble recombinant human IL-6 protein. SDS-PAGE showed that its molecular weight was about 21kDand could be specifically recognized by anti IL-6 antibody. Moreover, the recombinant protein could stimulate the proliferation of IL-6 dependent cell line T1165, and its specific activity was about 1 脳 10 6 Ur / mg. The recombinant human IL-6 protein with high soluble expression was obtained in this experiment, which laid a foundation for further study of human IL-6.
【作者單位】： 上海交通大學藥學院;聊城大學藥學院;第二軍醫(yī)大學腫瘤研究所;
【分類號】：R392.1

【參考文獻】

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本文編號：1692270