本文選題：IL-　切入點(diǎn)：原核表達(dá)純化　出處：《現(xiàn)代免疫學(xué)》2013年06期

【摘要】：使用大腸桿菌BL21(DE3)重組表達(dá)可溶性人IL-6并對(duì)其進(jìn)行純化和活性鑒定。以人激活T細(xì)胞總RNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增人IL-6的基因片段并將其克隆到原核表達(dá)載體pET32a(+)中,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),優(yōu)化表達(dá)條件獲得可溶性表達(dá)目的蛋白。細(xì)菌裂解上清經(jīng)鎳金屬螯和層析純化,SDS-PAGE鑒定其分子量大小,western blot鑒定其免疫原性,并通過IL-6依賴的細(xì)胞株T1165分析重組蛋白的活性。成功構(gòu)建了pET32a(+)/IL-6表達(dá)載體,并獲得了可溶性表達(dá)的重組人IL-6蛋白。SDS-PAGE顯示,其分子量約為21kD,可被抗IL-6抗體特異性識(shí)別,并且該重組蛋白可刺激IL-6依賴的細(xì)胞株T1165增殖,比活性與標(biāo)準(zhǔn)品一致,約為1×106 U/mg。本實(shí)驗(yàn)獲得了可溶性高表達(dá)的重組人IL-6蛋白,為進(jìn)一步研究人IL-6奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:The soluble human IL-6 was expressed and purified by E. coli BL21DE3. The total RNA of human activated T cells was used as template. The gene fragment of human IL-6 was amplified by reverse transcription PCR and cloned into the prokaryotic expression vector pET32a (). The recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli BL21DE-3, and the soluble expression protein was obtained by optimizing the expression conditions. The bacterial lytic supernatant was purified by nickel metal chelate and chromatography. Its molecular weight was identified by western blot and its immunogenicity was identified. The activity of recombinant protein was analyzed by IL-6 dependent cell line T1165. The expression vector of pET32awas successfully constructed, and the soluble recombinant human IL-6 protein. SDS-PAGE showed that its molecular weight was about 21kDand could be specifically recognized by anti IL-6 antibody. Moreover, the recombinant protein could stimulate the proliferation of IL-6 dependent cell line T1165, and its specific activity was about 1 脳 10 6 Ur / mg. The recombinant human IL-6 protein with high soluble expression was obtained in this experiment, which laid a foundation for further study of human IL-6.
【作者單位】： 上海交通大學(xué)藥學(xué)院;聊城大學(xué)藥學(xué)院;第二軍醫(yī)大學(xué)腫瘤研究所;
【分類號(hào)】：R392.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1692270