本文選題：動(dòng)脈粥樣硬化　切入點(diǎn)：炎癥刺激　出處：《廣州中醫(yī)藥大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：第一部分實(shí)驗(yàn)研究一脂多糖慢性炎癥刺激對(duì)大鼠AS模型的影響目的：本部分主要探討反復(fù)肌肉注射脂多糖誘導(dǎo)慢性炎癥反應(yīng)對(duì)大鼠AS模型形成的影響及其可能的機(jī)制。在高脂飲食與腹腔注射維生素D3的傳統(tǒng)AS大鼠模型基礎(chǔ)上,通過定期肌肉注射不同劑量脂多糖模擬慢性感染性炎癥過程,以三因素強(qiáng)化干預(yù)方式建立大鼠AS模型,觀察脂多糖對(duì)AS大鼠主動(dòng)脈斑塊形成的影響以及血脂水平、炎癥因子的變化,探討一種快速、穩(wěn)定、經(jīng)濟(jì)AS大鼠造模方式及其相關(guān)機(jī)制。方法：本實(shí)驗(yàn)通過定期肌肉注射脂多糖的方法在高脂飲食復(fù)合腹腔注射維生素D。的大鼠體內(nèi)誘導(dǎo)一個(gè)持續(xù)性的慢性感染性炎癥反應(yīng),以促進(jìn)大鼠主動(dòng)脈AS病變。根據(jù)處理因素不同分為4個(gè)組,每組8只大鼠(雄性SD大鼠,SPF級(jí),180g-220g),具體分組為空白對(duì)照組(普通飲食)、模型組(高脂飲食+腹腔注射維生素D3)、低劑量組(模型組造�；A(chǔ)上+低劑量脂多糖注射)、高劑量組(模型組造�；A(chǔ)上+高劑量脂多糖注射)。在第10周實(shí)驗(yàn)結(jié)束后采用腹主動(dòng)脈采血休克法處死動(dòng)物留取標(biāo)本,采用ELISA法檢測(cè)血清TNF-α、IL-6水平；采用酶比色法檢測(cè)血脂CHOL、TG、HDL-C、LDL-C水平；胸主動(dòng)脈標(biāo)本組織行HE染色并在光鏡下進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)觀察及積分評(píng)價(jià)。結(jié)果：1.干預(yù)組以及模型組較空白對(duì)照組血清CHOL、TG、LDL-C水平明顯升高(P0.05),提示高脂血癥大鼠模型建立。低劑量組與模型組血脂水平差異不大,高劑量組與模型組相比,血清CHOL、LDL-C、TG水平明顯升高(P0.05)；2.干預(yù)組以及模型組較空白對(duì)照血清TNF-a、IL-6水平明顯升高(P0.05),提示脂多糖刺激后大鼠機(jī)體處于慢性炎癥反應(yīng)狀態(tài),在高脂復(fù)合腹腔注射維生素D3基礎(chǔ)上給予不同劑量?jī)?nèi)毒素誘導(dǎo)可以誘導(dǎo)慢性炎癥反應(yīng),提高血清TNF-a、IL-6等炎癥因子水平,以高劑量組誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)作用最為明顯(P0.05)；3.主動(dòng)脈HE染色,模型組可見血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)紊亂,內(nèi)膜明顯增厚,主動(dòng)脈壁節(jié)段性硬化斑塊,可見脂質(zhì)斑塊、泡沫樣細(xì)胞以及鈣質(zhì)沉積,斑塊向管腔內(nèi)突起形成狹窄；低劑量組較模型組內(nèi)膜增厚明顯,內(nèi)膜下泡沫細(xì)胞聚集伴有炎性細(xì)胞浸潤(rùn),多處形成動(dòng)脈粥樣硬性斑塊；高劑量組主動(dòng)脈病變改變明顯,血管內(nèi)皮連續(xù)性受損害,內(nèi)膜增厚,大量脂質(zhì)斑塊以及泡沫樣細(xì)胞積聚,藍(lán)色鈣化病灶,炎癥細(xì)胞局部浸潤(rùn),動(dòng)脈粥樣斑塊不穩(wěn)定,部分斑塊破裂出血,管腔內(nèi)有混合性血栓,多處有動(dòng)脈粥樣斑塊向管腔內(nèi)突起管腔狹窄明顯,主動(dòng)脈染色等級(jí)積分高劑量組明顯高于模型組(P0.05)。結(jié)論：1.高脂飲食+腹注維生素D3可使AS大鼠TC、TG、LDL-C水平升高,疊加不同劑量脂多糖注射的作用下可進(jìn)一步協(xié)同提高TC、TG、LDL-C水平,以高劑量脂多糖組加重血脂代謝紊亂明顯。2.高脂飲食+腹注維生素D3可使大鼠血清TNF-α、IL-6水平升高,脂多糖刺激可加速這種炎癥反應(yīng)進(jìn)程,進(jìn)一步提高TNF-α、IL-6水平,以高劑量組效果最為明顯；3.脂多糖促AS可能機(jī)制為促進(jìn)炎癥反應(yīng)以及血脂代謝紊亂,炎癥細(xì)胞大量釋放激活后損傷血管內(nèi)皮以及形成泡沫細(xì)胞吞噬脂質(zhì),加劇脂質(zhì)氧化代謝紊亂以及脂質(zhì)沉積從而進(jìn)一步促進(jìn)AS斑塊形成或斑塊不穩(wěn)定。第二部分實(shí)驗(yàn)研究二清熱、活血中藥對(duì)AS大鼠的血脂、炎癥因子水平以及TLR4相關(guān)信號(hào)通路影響的實(shí)驗(yàn)研究目的：通過高脂飲食聯(lián)合維生素D3、脂多糖注射建立大鼠AS模型,選用清熱、活血中藥雙黃連、丹參多酚酸鹽注射液干預(yù)復(fù)合因素所致的大鼠AS模型,從血脂,IL-6、TNF-α、P-selectin,主動(dòng)脈病理形態(tài)改變比較兩者的療效,同時(shí)從TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路探討雙黃連以及丹參多酚酸鹽干預(yù)AS的可能機(jī)制,為清熱、活血法治療AS及其相關(guān)疾病提供基礎(chǔ)依據(jù)。方法：SD雄性大鼠48只,SPF級(jí),180-220g,試驗(yàn)性喂養(yǎng)3天后隨機(jī)分6組(n=8),具體分組為丹參多酚酸鹽(丹多酚)低劑量組(20mg/kg)、丹多酚高劑量組(60mg/kg)、雙黃連低劑量組(750mg/kg)、雙黃連高劑量組(2250mg/kg)、模型對(duì)照組、空白對(duì)照組。除了空白對(duì)照組,藥物干預(yù)組與模型組的造模方法按照實(shí)驗(yàn)部分一中高劑量脂多糖注射(150ug/Kg,1周/1次,共6次)、70萬IU/Kg維生素D3一次性腹腔注射聯(lián)合高脂飲食進(jìn)行復(fù)合造模,實(shí)驗(yàn)第6周開始,采用腹腔注射雙黃以及丹多酚注射液進(jìn)行干預(yù),每日1次(共6周),空白對(duì)照組以及模型對(duì)照組則給予等量的生理鹽水注進(jìn)行腹注。第12周實(shí)驗(yàn)結(jié)束后采用腹主動(dòng)脈采血休克法處死動(dòng)物留取標(biāo)本取材進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。ELISA法檢測(cè)血清TNF-α、IL-6、P-selection水平；采用酶比色法檢測(cè)血脂CHOL、TG、HDL-C、LDL-C水平；主動(dòng)脈標(biāo)本組織分別行HE染色進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)觀察,分別采用免疫組化法以及Western Blot法檢測(cè)主動(dòng)脈組織TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表達(dá)情況以及水平。結(jié)果：1.雙黃連、丹參多酚酸鹽注射液均能不同程度降低AS大鼠血脂水平,在CHOL、TG、LDL-C方面,高、低劑量的雙黃連以及丹參多酚酸鹽較模型組均有明顯下降(P0.05),低劑量丹參多酚酸鹽組在降低TG水平方面優(yōu)于低劑量雙黃連組(P0.05)；高劑量丹參多酚酸鹽組降低LDL-C水平略優(yōu)于雙黃連組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.雙黃連、丹參多酚酸鹽注射液均能不同程度降低AS大鼠血清TNF-a、IL-6、P-selectin水平,在TNF-α水平方面,低劑量雙黃連、丹參多酚酸鹽組較模型組下調(diào)不明顯(P0.05),高劑量的雙黃連以及丹參多酚酸鹽組較模型組均有明顯下降(P0.05)；在IL-6水平方面,低劑量雙黃連組水平較模型組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),高劑量雙黃連組與低、高劑量丹參多酚酸鹽組較模型組明顯下降(P0.05),高劑量組下調(diào)IL-6水平優(yōu)于低劑量組,雙黃連組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而丹參多酚酸鹽組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；在Ps水平方面,低、高劑量雙黃連組較模型組有下調(diào),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而低高劑量丹參多酚酸鹽組較模型組明顯下調(diào)Ps水平(P0.05)。3.免疫組化與WB檢測(cè)主動(dòng)脈組織TLR4、MyD88、NF-κB蛋白,空白對(duì)照組主動(dòng)脈未見斑塊形成,主動(dòng)脈組織TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表達(dá)為陰性,模型組主動(dòng)脈斑塊TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表達(dá)呈強(qiáng)陽性表達(dá)；采用不同劑量雙黃連注射液、丹參多酚酸鹽注射液進(jìn)行干預(yù)后均能不同程度減少斑塊內(nèi)TLR4、MyD88、NF-κB蛋白的表達(dá),低劑量雙黃連與丹參多酚酸鹽組較模型組均能有下降動(dòng)脈粥樣斑塊組織TLR4、MyD88蛋白表達(dá),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),高劑量雙黃連與丹參多酚酸鹽組較模型組則顯著降低TLR4、MyD88表達(dá),且高劑量組優(yōu)于低劑量組(P0.05)；NF-κB蛋白,高、低劑量的雙黃連以及丹參多酚酸鹽組較模型組下降NF-κB蛋白的表達(dá)(P0.05),且兩個(gè)藥物的高劑量組均優(yōu)于低劑量組(P0.05)。4.主動(dòng)脈組織HE染色光鏡下觀察,模型組血管內(nèi)皮連續(xù)性受損害,內(nèi)膜增厚明顯并可見平滑肌細(xì)胞增殖和遷移,多處有粥樣斑塊形成,斑塊內(nèi)可見脂質(zhì)斑塊和泡沫細(xì)胞積聚,藍(lán)色顆粒鈣化灶,炎性細(xì)胞聚集,管腔可見斑塊破裂,混合血栓,主動(dòng)脈管腔明顯狹窄：低劑量雙黃連注射組較模型組主動(dòng)脈斑塊改善程度不夠明顯,高劑量的雙黃連以及低、高劑量丹參多酚酸鹽組較模型組從內(nèi)膜增厚程度、泡沫細(xì)胞、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、脂質(zhì)沉積以及斑塊大小程度均有有所改善,提示雙黃連注射液、丹參多酚酸鹽注射液對(duì)復(fù)合因素導(dǎo)致的大鼠AS模型能夠起到保護(hù)血管內(nèi)皮,減少泡沫細(xì)胞以及脂質(zhì)沉積,延緩并穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣斑塊,高劑量丹參多酚酸鹽略優(yōu)于高劑量雙黃連。結(jié)論：1.復(fù)合因素復(fù)制的AS大鼠模型中,TLR4、MyD88、NF-κ0蛋白表達(dá)升高,TNF-α、IL-6水平升高,提示高脂飲食以及脂多糖刺激通過激活TLR4信號(hào),經(jīng)過MyD88依賴途徑激活NF-κβ蛋白促進(jìn)下游炎癥因子釋放,從而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化；2.雙黃連、丹參多酚酸鹽均能降低AS大鼠炎癥因子TNF-α、IL-6水平,減輕炎癥反應(yīng)抑制AS進(jìn)展,丹參多酚酸鹽還可通過下調(diào)Ps進(jìn)一步穩(wěn)定及延緩動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的進(jìn)展；3.雙黃連、丹參多酚酸均能降低AS大鼠模型血脂水平,其中丹參多酚酸鹽降低LDL-C、TG效果略優(yōu)于雙黃連注射液；4.雙黃連、丹參多酚酸鹽通過不同程度干預(yù)TLR4/MyD88/NF-κβ信號(hào)通路從而抑制動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程,穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣斑塊；5.丹參多酚酸鹽在抗大鼠AS進(jìn)程以及促進(jìn)斑塊穩(wěn)定上優(yōu)于雙黃連,這與丹參多酚酸鹽在降低TG、LDL-C水平,抑制血小板活化Ps的方面略優(yōu)于雙黃連注射液有關(guān)。第三部分臨床研究AM I熱毒證候病因探討的臨床回顧研究目的：本研究以冠心病急性心肌梗死患者(AMI, Acute myocardium infarction)為研究對(duì)象,對(duì)我院近幾年AMI患者的中醫(yī)證候,冠心病危險(xiǎn)因素、理化檢查、血管病變情況、住院病情以及并發(fā)癥等進(jìn)行調(diào)查分析,并重點(diǎn)對(duì)可能揭示AMI熱毒證候病因的要素進(jìn)行單因素以及多因素Logistic篩選分析,為探討冠心病熱毒證病機(jī)、指導(dǎo)清熱、活血法治療冠心病提供臨床證據(jù)。方法：?jiǎn)沃行�、回顧性調(diào)查方法,以符合納入標(biāo)準(zhǔn)的的患者為研究對(duì)象,設(shè)計(jì)《冠心病急性心肌梗死患者證候與病情調(diào)查表》對(duì)研究對(duì)象的中醫(yī)證候、冠心病危險(xiǎn)因素、理化檢查、住院病情等資料進(jìn)行收集整理,重點(diǎn)對(duì)可能揭示AMI熱毒證候病因的要素進(jìn)行單因素以及多因素Logistic回歸分析進(jìn)篩選。結(jié)果：1.本研究中總共納入322例研究對(duì)象。AMI中醫(yī)證型以實(shí)證,虛實(shí)夾雜為主,證候分布頻次以血瘀、熱毒、痰濁、氣滯等實(shí)證為主,單純以某一病理因素為主的實(shí)證證型比例較少,實(shí)證之間多有兼夾,其中以熱毒血瘀、痰瘀互結(jié)兩者在實(shí)證中所占比例最高；在虛實(shí)夾雜證中,以血瘀、痰濁兼夾氣虛證多見,熱毒證組在本研究中的AMI患者中所占的比例為42.20%(136例),非熱毒組所占的比例為57.8%(186例)。2.本研究中,男性是AMI的高發(fā)人群,比例高達(dá)82.9%,心肌梗死中吸煙人群占37.2%,合并高血壓病史、糖尿病病史、高脂血癥、心腦血管家族史比例分別為51.8%、36.6%、64.9%、12.4%,進(jìn)行單因素分析發(fā)現(xiàn),AMI熱毒證患者多為吸煙、辛辣厚味飲食、糖尿病、高脂血癥多重心血管危險(xiǎn)因素聚集人群(P0.05),進(jìn)行多因素logistic回歸分析發(fā)現(xiàn),吸煙、低密度脂蛋白、甘油三酯三個(gè)因子是預(yù)測(cè)AMI熱毒證候病因的獨(dú)立要素,OR值分別為1.755、1.637、1.483。3.本研究中AMI熱毒證與非熱毒證病情以及預(yù)后方面,在病變血管數(shù)上,熱毒組的三支血管病變數(shù)目以及平均病變血管數(shù)目較非熱毒組多(P0.05),在PCI術(shù)后并發(fā)癥與合并癥方面：泵功能水平、低血壓狀態(tài)、機(jī)械并發(fā)癥、肺部感染的組間分布未見明顯差異(P0.05),在住院期間死亡的終點(diǎn)事件上非熱毒證組(4.3%)高于熱毒證組(1.5%),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,在惡性心律失常的發(fā)生率,非熱毒證組高于熱毒證組(P0.05),這也是非熱毒證組死亡率稍高于熱毒證組的主要原因；無創(chuàng)心功能評(píng)估方面,在左心室射血分?jǐn)?shù)、左心室舒張末容積指標(biāo)上,熱毒證組均差于非熱毒證組(P0.01),提示冠心病急性心肌梗死熱毒證患者遠(yuǎn)期預(yù)后可能較差,發(fā)生心腦血管不良事件可能性更大,具體結(jié)果需要完善隨訪調(diào)查研究以進(jìn)一步得出嚴(yán)謹(jǐn)結(jié)論。結(jié)論：AMI中醫(yī)證型以實(shí)證,虛實(shí)夾雜為主,證候分布頻次以血瘀、熱毒、痰濁等實(shí)證為主；AMI熱毒證候患者為吸煙、辛辣厚味飲食、糖尿病、高脂血癥多重心血管危險(xiǎn)因素聚集人群,其中吸煙、低密度脂蛋白、甘油三酯三個(gè)因子是AMI熱毒證候病因的獨(dú)立要素,AMI熱毒證組冠脈血管病變總體程度以及左心室射血分?jǐn)?shù)、左心室舒張末容積方面嚴(yán)重于非熱毒證組,提示AMI熱毒證患者遠(yuǎn)期預(yù)后可能較差,發(fā)生心腦血管不良事件可能性更大,提示臨床對(duì)一些長(zhǎng)期吸煙、血脂水平異常升高的冠心病患者應(yīng)加強(qiáng)戒煙宣教,合理改善膳食結(jié)構(gòu),降低血脂水平,同時(shí)在西藥治療的基礎(chǔ)上應(yīng)增加清熱解毒活血中藥方劑的使用,從而改善患者的臨床癥狀以及遠(yuǎn)期預(yù)后。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R285.5;R-332

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 權(quán)媛;錢民章;;絞股藍(lán)總甙對(duì)高脂誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠炎性分子表達(dá)的影響[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志;2010年04期

，

本文編號(hào)：1686781