本文選題：系統(tǒng)性硬化病　切入點：白細胞介素17A　出處：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分抗IL-17A單克隆抗體對系統(tǒng)性硬化病小鼠模型皮膚和肺部纖維化病變的作用目的:研究白細胞介素(IL)-17A在系統(tǒng)性硬化病(SSc)小鼠模型皮膚和肺組織中的表達,并探討抗IL-17A單克隆抗體對SSc小鼠模型纖維化病變的作用。方法:將24只雌性BALB/c小鼠隨機分為4組,每組6只,包括正常對照組(小鼠背部皮下注射磷酸鹽緩沖液(PBS))、模型組(小鼠背部皮下注射博來霉素(BLM))、抗體組(BLM+抗IL-17A單克隆抗體)、同型對照組(BLM+同型對照)。觀察各組小鼠皮膚、肺臟的病理變化,計算皮膚、肺臟炎癥評分及纖維化評分,免疫組化法檢測小鼠皮膚和肺組織IL-17A細胞因子的表達,熒光定量PCR(RT-PCR)檢測小鼠皮膚及肺臟IL-17A、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β_1、I型膠原m RNA的表達。結(jié)果:1、抗體組小鼠皮膚厚度(61.08±5.68μm)、皮膚炎癥評分(2.47±0.15)明顯低于模型組(84.43±6.19μm、2.83±0.24)及同型對照組(83.21±5.72μm、2.85±0.19)(P0.05)。2、抗體組小鼠肺臟纖維化、炎癥評分(2.53±0.18、1.87±0.12)低于模型組(3.07±0.24、2.83±0.24)及同型對照組(3.03±0.29、2.28±0.16)(P0.05)。3、免疫組化測定小鼠皮膚IL-17A細胞因子的表達,抗體組的積分光密度(IOD)值(4.74±1.50)高于正常對照組(1.32±0.85)而低于模型組(9.95±3.06)和同型對照組(10.02±2.00)(P0.05)。4、免疫組化測定小鼠肺臟IL-17A細胞因子的表達,抗體組的IOD值(36.64±9.45)高于正常對照組(17.77±9.76)而低于模型組(59.53±15.40)和同型對照組(61.46±16.91)(P0.05)。5、抗體組小鼠皮膚中IL-17A(3.00±1.20)、TGF-β_1(3.20±1.27)、I型膠原(3.30±0.88)m RNA的表達量低于模型組(6.00±2.19、5.73±2.29、5.70±2.25)和同型對照組(5.98±2.50、5.25±1.75、5.27±2.12)(P0.05)。6、抗體組小鼠肺臟中IL-17A(1.57±0.39)、TGF-β_1(1.83±0.75)、I型膠原(1.50±0.58)m RNA的表達量低于模型組(2.44±0.55、3.04±0.84、2.40±0.73)和同型對照組(2.43±1.09、2.91±1.0、2.32±0.85)(P0.05)。7、免疫組化檢測小鼠皮膚IL-17A細胞因子的表達量與皮膚炎癥評分、皮膚厚度、皮膚TGF-β_1、I型膠原m RNA的表達量密切正相關(guān)。8、免疫組化檢測小鼠肺組織IL-17A細胞因子的表達量與肺部炎癥、纖維化評分、肺組織的TGF-β_1、I型膠原m RNA的表達量密切正相關(guān)。結(jié)論:1、IL-17A在SSc小鼠模型皮膚和肺組織中表達增高,IL-17A水平與SSc炎癥和纖維化程度呈正相關(guān)。2、IL-17A與TGF-β_1可能共同作用參與了SSc的發(fā)病,阻斷IL-17A可抑制TGF-β_1、I型膠原m RNA的表達,從而減少SSc的炎癥及纖維化病變。第二部分體外IL-17A對系統(tǒng)性硬化病小鼠模型肺成纖維細胞分泌功能的影響目的:觀察IL-17A及其單克隆抗體對SSc小鼠模型肺成纖維細胞(FB)分泌功能的影響,進一步探討IL-17A在SSc纖維化形成中的作用。方法:選用SSc小鼠模型肺組織進行原代培養(yǎng)FB,通過倒置顯微鏡觀察形態(tài),將培養(yǎng)的FB分為3組:對照組(FB+DMEM培養(yǎng)基)、刺激組(FB+IL-17A)、阻斷組(FB+抗IL-17A單克隆抗體),培養(yǎng)48小時,用RT-PCR檢測各組細胞I型膠原、TGF-β_1 m RNA的表達,酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測培養(yǎng)液上清IL-6、TGF-β_1的水平。結(jié)果:1、培養(yǎng)的肺組織塊緊密貼壁,倒置顯微鏡下觀察組織塊為暗黑色遮光區(qū)域,4-6天可見周圍有以梭形細胞游出,逐漸密集,11-20天細胞可傳代。2、阻斷組細胞TGF-β_1(18.73±5.52)、I型膠原(342.66±78.39)m RNA表達量低于刺激組(57.17±12.40、556.52±116.04)(P0.05),而高于對照組(3.53±0.94、216.49±18.33)(P0.05)。3、阻斷組細胞培養(yǎng)上清液IL-6和TGF-β_1的水平(3009.13±198.76pg/ml、292.56±54.20pg/ml)低于刺激組(3812.54±92.03pg/ml、527.38±41.00pg/ml)(P0.05),而高于對照組(2561.28±283.70pg/ml、217.05±55.08pg/ml)(P0.05)。結(jié)論:1、IL-17A可促進SSc小鼠模型肺FB TGF-β_1、I型膠原m RNA的表達,IL-6和TGF-β_1的分泌。2、阻斷IL-17A可抑制FB I型膠原的產(chǎn)生,IL-6和TGF-β_1的分泌進而抑制SSc小鼠皮膚及肺臟的纖維化病變。
[Abstract]:The first part of the role of anti IL-17A monoclonal antibody on mice model of systemic sclerosis skin and lung fibrosis Objective: To study the effects of interleukin (IL) -17A in systemic sclerosis (SSc) expression in mouse model of skin and lung tissues, and to investigate the anti IL-17A monoclonal antibody on SSc mice model of fibrosis lesions. Methods: 24 female BALB/c mice were randomly divided into 4 groups, 6 rats in each group, including control group (subcutaneous injection of phosphate buffer (PBS)), model group (subcutaneous injection of bleomycin (BLM) group (BLM+) antibody, anti IL-17A monoclonal antibody, the same type) the control group (BLM+ control). To observe the skin of mice, the pathological changes of lung, calculation of skin, lung inflammation and fibrosis score score, immunohistochemistry was used to detect the expression of skin and lung tissue of mice IL-17A cell factor, fluorescence quantitative PCR detection (RT-PCR) 灝忛紶鐨偆鍙婅偤鑴廔L-17A,杞寲鐢熼暱鍥犲瓙(TGF)-尾_1,I鍨嬭兌鍘焟 RNA鐨勮〃杈，

本文編號：1637263