本文選題：miR-22　切入點：VE-cadherin　出處：《華中農(nóng)業(yè)大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：血管內(nèi)皮屏障,控制著血管與相鄰組織間的物質(zhì)交換,其功能的實現(xiàn)主要依賴于血管內(nèi)皮細胞間的黏附連接。血管內(nèi)皮細胞鈣黏蛋白(VE-cadherin)作為黏附連接中的主要蛋白,其分布與功能狀態(tài)的改變直接影響著血管內(nèi)皮屏障功能的實現(xiàn)。微小RNA(miRNA)是一類長為19-25nt的非編碼小分子RNA,能與靶基因mRNA的3’UTR上的序列結(jié)合,通過誘導靶mRNA降解或抑制蛋白翻譯,在血管生成、炎癥反應與疾病發(fā)生等生物學過程中發(fā)揮關鍵作用。miR-22是由22個核苷酸組成的小RNA,具有高度的保守性,并在疾病組織中呈現(xiàn)表達差異。研究表明,miR-22在胚胎發(fā)育、腫瘤發(fā)生等方面均起重要作用。然而在血管內(nèi)皮領域,miR-22的作用靶點和相關生物學功能尚待研究。本研究預測并驗證了miR-22在血管內(nèi)皮細胞中的靶基因VE-cadherin,探討了miR-22在炎癥反應和斑馬魚血管發(fā)育中的調(diào)控作用。主要研究內(nèi)容如下:1.miR-22靶基因預測和驗證:首先,生物信息學軟件預測miR-22在血管內(nèi)皮上的靶點,發(fā)現(xiàn)miR-22能與VE-cadherin 3’UTR上的序列互補結(jié)合,提示VE-cadherin是miR-22的潛在靶基因。雙熒光素酶活性實驗結(jié)果表明,VE-cadherin是miR-22的靶基因。將miR-22模擬物或抑制劑轉(zhuǎn)染到臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)后,利用qPCR和Western Blot檢測VE-cadherin的表達,發(fā)現(xiàn)miR-22能抑制VE-cadherin的轉(zhuǎn)錄與翻譯。2.miR-22對炎癥反應的影響:qPCR檢測炎性組織與細胞中miR-22和VE-cadherin的表達,結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對照組相比,炎性組織與細胞中miR-22顯著下調(diào),VE-cadherin顯著上調(diào),這提示,miR-22調(diào)控VE-cadherin可能與炎癥反應相關。將miR-22模擬物轉(zhuǎn)染到HUVECs細胞后,對炎性因子IL-1β、IL-6和IL-8的表達和活細胞數(shù)目進行檢測,結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染miR-22后,IL-1β、IL-6和IL-8的表達顯著上調(diào),細胞活性顯著降低,這表明,miR-22能促進炎性因子的分泌,并能抑制內(nèi)皮細胞的增殖。將miR-22模擬物注射到C57BL/6小鼠中,qPCR檢測小鼠肺組織中炎性因子IL-1β和TNF-α的表達,并對肺髓過氧化物酶(MPO)活性進行檢測,結(jié)果顯示,過表達miR-22后,肺組織中IL-1β與TNF-α的mRNA水平和MPO活性均顯著上調(diào)。這說明,過表達miR-22能促進小鼠肺組織的炎性反應,并能造成肺組織損傷。3.miR-22對斑馬魚血管發(fā)育的影響:qPCR檢測斑馬魚胚胎中miR-22的時空表達特性,結(jié)果顯示,在斑馬魚發(fā)育胚胎發(fā)育時期miR-22能連續(xù)表達。將miR-22模擬物顯微注射到斑馬魚胚胎中,利用qPCR和Western Blot檢測VE-cadherin的表達,結(jié)果顯示,注射miR-22的斑馬魚胚胎發(fā)育出現(xiàn)畸形,VE-cadherin的mRNA和蛋白水平顯著下調(diào)。在熒光標記的Tg(fli1:EGFP)斑馬魚胚胎中過表達miR-22,熒光顯微鏡觀察血管發(fā)育,并利用胚胎整體原位雜交和qPCR檢測血管標志基因fli1與flk1的表達,結(jié)果顯示,注射miR-22后斑馬魚血管發(fā)育出現(xiàn)異常,并且fli1與flk1的表達顯著下調(diào)。然而將VE-cadherin的mRNA與miR-22模擬物共注射胚胎后,斑馬魚血管發(fā)育明顯恢復,且fli1與flk1的表達顯著增強。這說明,miR-22能通過調(diào)節(jié)VE-cadherin的表達影響斑馬魚的血管發(fā)育。結(jié)論:miR-22能靶向VE-cadherin并調(diào)控其表達;過表達miR-22能促進炎性的因子表達,抑制內(nèi)皮細胞增殖,并能造成組織的損傷;miR-22通過調(diào)控VE-cadherin的表達引起斑馬魚血管發(fā)育畸形。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R3416

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本文編號：1613149