本文選題：Hrd1　切入點(diǎn)：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白降解　出處：《蘇州大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：Hrd1,又名synoviolin,屬于E3泛素鏈接酶。它位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上,其N端含有親水性的六次穿膜結(jié)構(gòu)域,位于胞漿中的C端含有RING-H2結(jié)構(gòu)域和脯氨酸富含域。RING-H2結(jié)構(gòu)域是Hrd1作為E3連接酶的催化活性結(jié)構(gòu)域,而脯氨酸富含域極有可能作為一個(gè)蛋白-蛋白相互作用的結(jié)合位點(diǎn)而募集胞漿中待泛素化的蛋白。早期的研究主要發(fā)現(xiàn)Hrd1可以識(shí)別、泛素化和轉(zhuǎn)運(yùn)靶蛋白而參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白降解途徑,這條途徑可以及時(shí)清除內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)的折疊錯(cuò)誤的蛋白,從而可以對(duì)合成的蛋白進(jìn)行質(zhì)量控制和維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的穩(wěn)態(tài)。之后的研究發(fā)現(xiàn)Hrd1不止可以泛素化折疊錯(cuò)誤的蛋白而介導(dǎo)它們的降解,它還可以降解其它非折疊錯(cuò)誤的蛋白從而參與到細(xì)胞的眾多生物學(xué)過(guò)程中。例如在DC細(xì)胞中,Hrd1可以泛素化Blimp1介導(dǎo)其降解來(lái)促進(jìn)DC細(xì)胞的抗原提成功能,在神經(jīng)元細(xì)胞中通過(guò)靶向淀粉樣前蛋白抑制神經(jīng)元變性。有研究報(bào)道,在體外細(xì)胞系中,Hrd1可以泛素化未折疊的Igμ和未被糖基化的Igκ鏈,這提示Hrd1可能通過(guò)泛素化生理?xiàng)l件下的這兩個(gè)分子來(lái)調(diào)控B的發(fā)育和免疫。為此,我們運(yùn)用B細(xì)胞系特異性Hrd1敲除小鼠模型來(lái)研究生理?xiàng)l件下Hrd1對(duì)B細(xì)胞的影響。目的:較為系統(tǒng)、全面地分析生理?xiàng)l件下Hrd1對(duì)B細(xì)胞發(fā)育分化、功能的影響及其生理/病理意義。解析Hrd1調(diào)控B細(xì)胞的分子機(jī)制。方法:運(yùn)用流式技術(shù)分析Hrd1-/-小鼠和WT小鼠B細(xì)胞亞群的組成、凋亡和增殖;用多種刺激源在體外活化B細(xì)胞,用T細(xì)胞依賴或非依賴性免疫方法免疫小鼠,然后運(yùn)用流式技術(shù)儀檢測(cè)B細(xì)胞的活化、凋亡、增殖和漿細(xì)胞分化,ELISA檢測(cè)抗體水平;運(yùn)用各種分子生物學(xué)方法進(jìn)一步研究Hrd1對(duì)B細(xì)胞調(diào)控的分子機(jī)制。結(jié)果:通過(guò)對(duì)骨髓和脾臟中B細(xì)胞發(fā)育各個(gè)階段的細(xì)胞和各亞群細(xì)胞進(jìn)行分析后,我們發(fā)現(xiàn)相對(duì)于正常小鼠,在骨髓中,Hrd1-/-large pre-B細(xì)胞比例增多、small pre-B減少、循環(huán)成熟B細(xì)胞減少;在脾臟中,Hrd1-/-小鼠總B細(xì)胞比例減少。通過(guò)體內(nèi)或體外活化成熟B細(xì)胞,我們發(fā)現(xiàn)相對(duì)于WT組,Hrd1-/-小鼠的B細(xì)胞活化后凋亡增多。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),一旦Hrd1被敲除,pre-BCR復(fù)合物和Fas分別在pro/preB細(xì)胞和活化的外周B細(xì)胞中積聚。后續(xù)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)證明它們作為Hrd1的底物被Hrd1泛素化,從而被蛋白酶體降解,所以Hrd1的缺失導(dǎo)致了它們?cè)诩?xì)胞中被累積。意義:本研究發(fā)現(xiàn)Hrd1通過(guò)泛素化pre-BCR和Fas,在兩個(gè)關(guān)節(jié)點(diǎn)調(diào)控了B細(xì)胞發(fā)育和活化。pre-BCR在pre-B細(xì)胞中的正常下調(diào)是pre-B細(xì)胞和后續(xù)B細(xì)胞發(fā)育成熟的必要條件。研究報(bào)道pre-BCR介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)可以負(fù)反饋下調(diào)pre-BCR的表達(dá),然而其它的pre-BCR下調(diào)機(jī)制則鮮有報(bào)道。本研究首次發(fā)現(xiàn)Hrd1可以在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)preBCR,從而調(diào)控影響B(tài)細(xì)胞的發(fā)育。Fas介導(dǎo)的活化誘導(dǎo)的凋亡可以下調(diào)免疫反應(yīng)和清除自身性反應(yīng)B細(xì)胞。目前對(duì)Fas轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控已有大量文獻(xiàn)報(bào)道,然而對(duì)其轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控則了解甚少。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)在活化的B細(xì)胞中Hrd1可以在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控Fas。這些結(jié)果提示E3泛素連接酶可以作為B細(xì)胞調(diào)控因子的調(diào)控因子來(lái)參與B細(xì)胞的發(fā)育分化及功能。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1603970