發(fā)布時間：2018-03-08 13:15

  本文選題：乙肝表面抗原　切入點(diǎn)：真核表達(dá)　出處：《實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志》2013年20期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:構(gòu)建pCMV-HBsAg-GFP真核表達(dá)載體,鑒定重組蛋白在293T細(xì)胞中的表達(dá)及抗原性。方法:以HBV轉(zhuǎn)基因鼠C57BL/6J-TgN(AlblHBV)44Bri基因組DNA為模板擴(kuò)增HBsAg基因片段,并將其插入到帶綠色熒光蛋白標(biāo)簽的真核表達(dá)載體pCMV-AC-GFP。通過陽離子聚合物將重組質(zhì)粒pCMV-HBsAg-GFP轉(zhuǎn)入293T細(xì)胞,熒光顯微鏡觀察重組蛋白的表達(dá),ELISA和Western Blotting鑒定其抗原性。結(jié)果:1%瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示,PCR擴(kuò)增片段大小符合HBsAg基因699 bp的理論值。重組質(zhì)粒經(jīng)PCR、酶切鑒定后也與理論值相符。熒光顯微鏡顯示,轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞48 h后,約50%呈亮綠色,細(xì)胞形態(tài)好,熒光表達(dá)強(qiáng)度高。ELISA和Western Blotting鑒定結(jié)果均為陽性。結(jié)論:成功構(gòu)建了pCMV-HBsAg-GFP真核表達(dá)質(zhì)粒,其表達(dá)的重組蛋白與天然HBsAg具有相同的抗原性。
[Abstract]:Objective: to construct pCMV-HBsAg-GFP eukaryotic expression vector and identify the expression and antigenicity of the recombinant protein in 293T cells. Methods: the HBsAg gene fragment was amplified by using the genomic DNA of C57BL / 6J-TgNfAlBHBV V44Bri transgenic mice as template. It was inserted into the eukaryotic expression vector pCMV-AC-GFPwith green fluorescent protein tag. The recombinant plasmid pCMV-HBsAg-GFP was transferred into 293T cells by cationic polymer. Fluorescence microscopy was used to observe the expression of the recombinant protein. Elisa and Western Blotting were used to identify its antigenicity. Results the results of 1% agarose gel electrophoresis showed that the amplified fragment size of the recombinant plasmid was in accordance with the theoretical value of 699bp of HBsAg gene. The fluorescence microscope shows that, After transfection of 293T cells for 48 h, about 50% cells showed bright green, good morphology, high intensity of fluorescence expression. Elisa and Western Blotting were positive. Conclusion: the eukaryotic expression plasmid of pCMV-HBsAg-GFP was constructed successfully. The expressed recombinant protein has the same antigenicity as natural HBsAg.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院兒科;南方醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號:81201295)
【分類號】：R392.1

【參考文獻(xiàn)】

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2 陳菊調(diào);高考學(xué)生HBsAg陽性率及抑郁心理調(diào)查[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2005年09期

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4 馬麗麗,王玉金,楊書豪,李燕珠,郭瑤,白仲虎,楊艷艷,朱國珍,鄭鵬舉,王玉珠;快速乙肝表面抗原膠體金免疫層析測定法的建立及應(yīng)用[J];標(biāo)記免疫分析與臨床;1997年04期

5 徐麗宏,梁國棟,付士紅,關(guān)坤萍,曹玉璽,吳士俊,夏國良,張智清;G145R突變后HBsAg“a”決定簇合成肽的免疫學(xué)特性分析[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2005年08期

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7 黃秋;;乙肝表面抗原(HBsAg)在哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)研究的回顧與展望[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;1989年05期

8 唐士安，郁耀武，丁治香，，宋金風(fēng);馬鞍山南食品及公共場所人員乙肝表面抗原和腸道致病菌的調(diào)查[J];中國公共衛(wèi)生;1995年08期

9 惠靜毅,李光地,孔玉英,汪垣;帶有preS抗原決定簇的乙肝表面抗原的DNA免疫研究[J];科學(xué)通報;1999年02期

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3 ;科學(xué)家獲變異鋸蛋白殺死腦細(xì)胞線索[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2005年

4 毛磊;動物實(shí)驗(yàn)首次表明瘋牛病有可能醫(yī)治[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

5 張明堯;器官移植的喜與憂[N];山東科技報;2000年

6 莊愉;神經(jīng)變性疾病藥物研究進(jìn)展[N];中國醫(yī)藥報;2005年

7 華訊;血清素可讓焦慮“走開”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2002年

8 ;疼痛機(jī)理獲新發(fā)現(xiàn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2000年

9 曲克;血清素作用獲新發(fā)現(xiàn)[N];中國醫(yī)藥報;2002年

10 記者 毛磊;是什么導(dǎo)致了瘋牛病？[N];新華每日電訊;2002年

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3 常洋;阿爾茨海默病轉(zhuǎn)基因動物模型的建立與發(fā)病機(jī)理研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

4 錢炳俊;乙型肝炎新型植物口服疫苗的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

5 馬曉軍;尿酸輔助樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)抗乙肝病毒免疫效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2007年

6 李匯華;人載脂蛋白AI轉(zhuǎn)基因小鼠抗實(shí)驗(yàn)性動脈粥樣硬化的分子病理學(xué)研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1998年

7 余立清;重組人ApoA-I基因轉(zhuǎn)基因小鼠的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1995年

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本文編號：1584048