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  本文關(guān)鍵詞： APE蛋白 p蛋白 相互作用　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報》2013年21期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的探討脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease,APE1)和p53蛋白內(nèi)源性和外源性相互結(jié)合作用。方法將重組質(zhì)粒pET42a-hAPE1轉(zhuǎn)染E.coli BL21(DE3),應(yīng)用IPTG誘導(dǎo)GST-APE1蛋白表達,鑒定后經(jīng)金屬螯合層析技術(shù)純化,通過Western blot鑒定純化蛋白,得到GST-APE1融合蛋白。免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)和GST蛋白沉降實驗分別檢測內(nèi)源性和外源性APE1和p53蛋白結(jié)合作用,免疫熒光標記結(jié)合激光共聚焦顯微鏡技術(shù)確定APE1和p53蛋白亞細胞定位。結(jié)果轉(zhuǎn)染質(zhì)粒經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達,應(yīng)用SDS-PAGE發(fā)現(xiàn)GST-APE1在預(yù)期位置64×103處存在陽性條帶,"Ni"柱純化后得到GST-APE1融合蛋白,通過Western blot鑒定。免疫共沉淀和GST蛋白沉降實驗證實APE1和p53存在內(nèi)源性和外源性結(jié)合作用。激光共聚焦顯微鏡觀察免疫熒光標記的APE1和p53蛋白均為核漿共表達蛋白,氧化應(yīng)激處理后,蛋白逐漸由胞漿向胞核移位,二者共定位于核膜處較明顯。結(jié)論 APE1和p53蛋白在A549和HeLa細胞中存在內(nèi)源性和外源性結(jié)合作用,可能與其轉(zhuǎn)錄調(diào)控及腫瘤放化療療效有關(guān)。
[Abstract]:Objective to investigate the interaction between apurinic / aprimidinic endonuclease (APE1) and p53 protein. Methods Recombinant plasmid pET42a-hAPE1 was transfected into E. coli BL21NDE3, GST-APE1 protein was induced by IPTG and purified by metal chelation chromatography. GST-APE1 fusion protein, Co-immunoprecipitation Co-IP) and GST protein sedimentation assay were used to detect the binding effect of endogenous and exogenous APE1 and p53 protein, respectively. The subcellular localization of APE1 and p53 protein was determined by immunofluorescence labeling and laser confocal microscopy. Results the expression of the transfected plasmid was induced by IPTG. The positive bands of GST-APE1 were found at the expected position of 64 脳 10 ~ 3 by SDS-PAGE, and the fusion protein of GST-APE1 was obtained after purification by "Ni" column. The results of Western blot identification, immunoprecipitation and GST protein sedimentation showed that APE1 and p53 had both endogenous and exogenous binding effects. Laser confocal microscopy showed that both APE1 and p53 proteins labeled by immunofluorescence were nucleoplasmic coexpression proteins. After oxidative stress, the proteins were gradually translocated from cytoplasm to nucleus, and the two proteins were located in the nuclear membrane. Conclusion APE1 and p53 proteins have endogenous and exogenous binding effects in A549 and HeLa cells. It may be related to its transcriptional regulation and the curative effect of radiotherapy and chemotherapy.
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所腫瘤中心;第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所病理科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81101783,81272499) 重慶市自然科學(xué)基金(CSTC2010BB5198)~~
【分類號】：R341

【參考文獻】

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【共引文獻】

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7 陳U

本文編號：1547578