本文關(guān)鍵詞： 毛乳頭細胞 脫分化 HaCaT細胞條件培養(yǎng)基 小分子化合物　出處：《吉林大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：表皮與真皮之間緊密聯(lián)系且精確復(fù)雜的相互作用決定著毛囊的生長。胚胎期毛囊的誘導(dǎo)和形成依賴于間充質(zhì)與表皮之間特化的真皮細胞與表皮干細胞的信息傳導(dǎo),出生后機體的毛囊的生長以及毛干的形成依賴于真皮毛乳頭結(jié)構(gòu)與其周圍的表皮基質(zhì)之間的聯(lián)系,成熟期毛囊的再生及周期性生長受控于間充質(zhì)中的信號分子與毛囊干細胞的作用。研究發(fā)現(xiàn)多種信號通路與毛囊的形成和生長有關(guān),毛囊的誘導(dǎo)及調(diào)控過程中多種信號之間精確的調(diào)控方式以及作用時間十分復(fù)雜。毛乳頭在表皮真皮相互作用中起決定性作用,離體培養(yǎng)的毛乳頭細胞可誘導(dǎo)毛囊新生,但從毛囊分離培養(yǎng)的毛乳頭細胞在常規(guī)培養(yǎng)條件下其生長特性顯著改變并且誘導(dǎo)毛發(fā)生成的能力迅速丟失,因此,維持毛乳頭細胞生物學(xué)特性是成功誘導(dǎo)毛發(fā)再生的關(guān)鍵。本研究以離體培養(yǎng)的毛乳頭細胞為對象,觀察到其在傳代過程中出現(xiàn)脫分化(dedifferentiation)現(xiàn)象,即生物學(xué)特性發(fā)生改變,包括細胞形態(tài)特征、特異性染色及標(biāo)志性基因的表達情況,之后通過制備HaCaT細胞條件培養(yǎng)基并在培養(yǎng)基中加入多種小分子化合物培養(yǎng)毛乳頭細胞,觀察檢測毛乳頭細胞基因和蛋白水平改變,從而證實HaCaT細胞條件培養(yǎng)基添加特定小分子化合物對逆轉(zhuǎn)毛乳頭細胞脫分化、維持毛乳頭細胞生物學(xué)特性具有促進作用。最后,應(yīng)用懸滴三維培養(yǎng)細胞的方法觀察HaCaT細胞條件培養(yǎng)基中添加特定小分子化合物的培養(yǎng)液對高代次毛乳頭細胞成細胞球能力以及細胞生物學(xué)特性的影響。結(jié)果:1.毛乳頭細胞隨著傳代次數(shù)的增加,出現(xiàn)脫分化現(xiàn)象,細胞體積逐漸增大,細胞生長速度減慢,特異性堿性磷酸酶(ALP)染色逐漸下降,其標(biāo)志性基因Sox2、Versican、ALP表達水平逐漸顯著下降,并且隨傳代次數(shù)的增加Wnt通路信號分子β-catenin和Lef-1蛋白表達顯著下降,TGF-β/Smad通路信號分子Smad2/3磷酸化水平則顯著上調(diào)。2.采用含1%血清培養(yǎng)基培養(yǎng)HaCaT細胞,選擇不同時間收集及不同體積分數(shù)配比的上清液制備條件培養(yǎng)基培養(yǎng)毛乳頭細胞,結(jié)果顯示24h收集、上清液占培養(yǎng)液體積分數(shù)為50%的培養(yǎng)組毛乳頭細胞Sox2和Versican基因表達上調(diào)最為顯著。3.與普通培養(yǎng)方式相比,應(yīng)用HaCaT細胞條件培養(yǎng)基中添加PDGF-AA、Wnt通路激活劑CHIR99021和TGF-β/Smad通路信號分子抑制劑SB431542的優(yōu)化培養(yǎng)基培養(yǎng)P7代毛乳頭細胞,可促進毛乳頭細胞標(biāo)志性基因Sox2和Versican以及蛋白Sox2、ALP和β-catenin的表達。4.應(yīng)用HaCaT條件培養(yǎng)液中添加PDGF-AA、CHIR99021和SB431542的優(yōu)化培養(yǎng)液對P7代毛乳頭細胞進行懸滴三維高密度培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)優(yōu)化培養(yǎng)液中培養(yǎng)的細胞球體積大于普通培養(yǎng)液中細胞球體積,并且細胞免疫熒光分析發(fā)現(xiàn)優(yōu)化培養(yǎng)液中毛乳頭細胞球高表達Sox2和ALP蛋白。結(jié)論:1.人毛乳頭細胞在傳代過程中出現(xiàn)脫分化現(xiàn)象,細胞逐步失去原有生物學(xué)特性。2.HaCaT細胞條件培養(yǎng)基及小分子化合物PDGF-AA、SB431542、CHIR99021聯(lián)合作用可逆轉(zhuǎn)毛乳頭細胞脫分化現(xiàn)象。3.應(yīng)用HaCaT條件培養(yǎng)基中添加PDGF-AA、CHIR99021和SB431542的優(yōu)化培養(yǎng)液對高代次毛乳頭細胞進行三維懸滴高密度培養(yǎng),有利于形成大小適宜的毛乳頭細胞球并可有效逆轉(zhuǎn)毛乳頭細胞脫分化。
[Abstract]:The growth of hair follicle and the formation and growth of hair follicle depend on the relationship between the mesenchymal stem cells and epidermal stromal cells .

【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R329.2

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李薇;李松澤;;HaCaT細胞誘導(dǎo)兔骨髓間充質(zhì)干細胞表達角蛋白的初步研究[J];皮膚性病診療學(xué)雜志;2014年02期

2 馬馨;陳洋;姜懷志;;哺乳動物毛囊結(jié)構(gòu)特征及調(diào)控機制[J];中國草食動物科學(xué);2013年01期

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本文編號：1543521