發(fā)布時間：2018-01-31 06:34

  本文關鍵詞： p204 卵巢早衰 D-半乳糖 小鼠模型　出處：《山東大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：干擾素(IFN)誘導蛋白在干擾素生物學功能的發(fā)揮中起著至關重要的作用,p204是干擾素誘導蛋白p200家族(IFI200)鼠類蛋白成員,該蛋白能與多種蛋白相互作用,并通過這些相互作用發(fā)揮抑制細胞增殖、阻斷細胞周期、促進細胞分化及感應外源雙鏈DNA入侵等重要作用。本論文用D-半乳糖注射法對遺傳背景相同的全身性p204基因敲除型(KO)小鼠和野生型(WT)小鼠進行卵巢早衰模型的構(gòu)建,觀察小鼠造模過程中的健康狀況。造模八周后組織切片染色觀察卵巢卵泡的發(fā)育的狀況。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清睪酮(T)、雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、黃體生成素(HL)水平。采用real-timePCR技術(shù)對卵巢組織c-myc、Bcl-2、Bax、CYP17A1、CYP19A1等基因表達水平進行檢測與分析。采用免疫組化法檢測Bcl-2、CYP17A1、CYP19A1蛋白在小鼠卵巢組織的表達和分布情況。實驗結(jié)果表明,在造模過程中,KO小鼠的體重及卵巢重量均顯著下降(p0.01),而WT小鼠變化不顯著,說明p204敲除使小鼠對D-半乳糖代謝紊亂導致的生理功能變化的影響更大。通過對卵巢組織的切片及染色觀察發(fā)現(xiàn)KO小鼠卵巢閉鎖卵泡和黃體增多,顆粒細胞排列稀疏,說明p204敲除對小鼠卵巢卵泡的發(fā)育產(chǎn)生了一定影響。對小鼠血清激素水平檢測發(fā)現(xiàn)KO小鼠睪酮(T)、促卵泡激素(FSH)、黃體生成素(LH)水平均顯著升高(p0.01)。說明p204基因敲除后使小鼠體內(nèi)的激素水平發(fā)生改變,導致卵泡發(fā)育功能下降,致使卵巢損傷。對小鼠卵巢相關基因檢測中,發(fā)現(xiàn)KO小鼠凋亡相關基因bax、原癌基因c-myc表達水平均顯著升高(p0.01),說明p204敲除對小鼠卵巢顆粒細胞凋亡產(chǎn)生影響,加速了卵巢早衰。還發(fā)現(xiàn)KO小鼠中性激素合成相關基因CYP17A1表達水平顯著升高(p0.01),CYP19A1基因表達水平均顯著降低(p0.01),說明p204敲除使小鼠體內(nèi)性激素尤其是雄激素表達水平發(fā)生改變,導致小鼠卵泡發(fā)育發(fā)生障礙,形成卵巢早衰。免疫組化結(jié)果顯示缺失p204導致小鼠卵巢內(nèi)Bcl-2、CYP17A1、CYP19A1蛋白的表達和分布發(fā)生改變,加速卵巢早衰形成。以上結(jié)果表明p204在小鼠卵巢卵泡發(fā)育中可能通過調(diào)控顆粒細胞增殖和凋亡的過程從而抵制卵巢早衰的形成。本論文為初步探究p204在小鼠POF卵泡發(fā)育中的作用,為進一步闡明卵巢早衰卵泡發(fā)育障礙的發(fā)病機制和預防早衰奠定基礎,具有重要的理論意義和臨床價值。本研究的創(chuàng)新點在于:1)使用D-半乳糖注射法對C57品系p204基因全身性敲除小鼠構(gòu)建卵巢早衰模型。2)發(fā)現(xiàn)缺失p204對小鼠卵巢組織產(chǎn)生損傷加速卵巢早衰。
[Abstract]:IFN- induced protein plays an important role in the biological function of interferon. P204 is a member of IFI200, a family of interferon inducible proteins (p200). The protein can interact with a variety of proteins, and through these interactions play a role in inhibiting cell proliferation, blocking cell cycle. Promoting cell differentiation and induction of exogenous double-stranded DNA invasion. In this study, we used Dgalactose injection method to study the genetic background of the mice with the same genetic background of p204 gene knockout type KOO and the wild type of p204. The model of premature ovarian failure was constructed in mice. The development of ovarian follicles was observed by histological staining eight weeks later. Serum testosterone (TX) and estradiol (E2) were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa). The levels of follicle stimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH) were determined by real-timePCR technique. The expression level of CYP19A1 and other genes were detected and analyzed. Bcl-2CYP 17A1 was detected by immunohistochemical method. The expression and distribution of CYP19A1 protein in mouse ovary. The results showed that the body weight and ovarian weight of KO mice decreased significantly (p0.01). The change of WT mice was not significant. The results showed that p204 knockout had a greater effect on the physiological function of mice caused by D-galactose metabolism disorder. The ovarian atresia follicles and luteal bodies of KO mice were found to be increased by the observation of sections and staining of ovarian tissue. The sparse arrangement of granulosa cells indicated that p204 knockout had a certain effect on the development of ovarian follicles in mice. The level of luteinizing hormone (LH) increased significantly (P 0.01), which indicated that the hormone level of mice was changed after p204 gene knockout, which resulted in the decline of follicle development function. The expression level of apoptosis-related gene baxand proto-oncogene c-myc in KO mice were significantly increased (P 0.01). The results showed that p204 knockout had an effect on the apoptosis of granulosa cells in mouse ovary. It was also found that the CYP17A1 expression level of sex hormone synthesis-related gene in KO mice was significantly increased (p 0.01). The expression level of CYP19A1 gene decreased significantly, indicating that p204 knockout could change the expression of sex hormone, especially androgen, and lead to follicular dysfunction in mice. The expression and distribution of CYP19A1 protein in mouse ovary were changed by the deletion of p204. The above results suggest that p204 may resist the formation of premature ovarian failure by regulating the process of granulosa cell proliferation and apoptosis. (4) role in the development of mouse POF follicles. In order to further elucidate the pathogenesis of ovarian premature failure follicular dysplasia and prevent premature failure lay a foundation. This study has important theoretical significance and clinical value. The innovation of this study lies in the use of Dgalactose injection method to construct premature ovarian failure model of C57 strain p204 gene knockout mice. It was found that the absence of p204 caused damage to ovarian tissue and accelerated premature ovarian failure in mice.
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R711.75;R-332

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本文編號：1478474