發(fā)布時(shí)間：2018-01-20 22:33

  本文關(guān)鍵詞： 缺血性腦卒中 自由基 氧化損傷 藥效學(xué)研究 神經(jīng)修復(fù) 細(xì)胞凋亡　出處：《暨南大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的參照CFDA、FDA和STAIR有關(guān)腦卒中藥物藥效學(xué)研究相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則,在SD大鼠永久性缺血腦卒中模型、缺血再灌注腦卒中模型以及全腦缺血腦卒中模型中系統(tǒng)規(guī)范的研究TBN的藥效學(xué)作用,并在永久性缺血腦卒中模型中對(duì)TBN的保護(hù)作用機(jī)理進(jìn)行深入研究,為T(mén)BN進(jìn)入臨床試驗(yàn)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ);同時(shí),通過(guò)完成TBN藥效學(xué)研究,在本實(shí)驗(yàn)室建立起系統(tǒng)規(guī)范的腦卒中藥物臨床前藥效學(xué)研究體系,用于其它腦卒中藥物的藥效學(xué)研究。方法1.應(yīng)用激光多普勒血流儀監(jiān)測(cè)SD大鼠損傷側(cè)大腦中動(dòng)脈供血區(qū)血流量變化,建立永久性缺血腦卒中模型,結(jié)合實(shí)驗(yàn)過(guò)程中大鼠體重、體溫、血?dú)獾壬碇笜?biāo)的監(jiān)測(cè),以Neurological severity score行為學(xué)變化和腦梗死面積為主要觀察指標(biāo),系統(tǒng)的研究TBN在永久性缺血腦卒中模型中的量效關(guān)系、治療時(shí)間窗、藥效學(xué)作用以及不同給藥方式的藥效學(xué)作用。2.應(yīng)用線栓法栓塞大鼠大腦中動(dòng)脈,建立缺血再灌注腦卒中模型,術(shù)后靜脈推注給予受試化合物TBN,聯(lián)合實(shí)驗(yàn)過(guò)程中腦血流量、血?dú)狻⑿穆�、血壓、體重、體溫等生理參數(shù)的監(jiān)測(cè),以大鼠Rotarod、Longa以及Neurological severity score三種行為學(xué)指標(biāo)和腦梗死面積為主要指標(biāo),研究TBN在缺血再灌注腦卒中大鼠中的藥效學(xué)作用;3.通過(guò)結(jié)扎SD大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈,建立全腦缺血腦卒中模型,術(shù)后7天一天2次靜脈注射給予30 mg/kg的受試化合物TBN,以Y迷宮、新物體識(shí)別、步態(tài)分析主要指標(biāo),聯(lián)合腦血流量、血?dú)狻Ⅲw重、體溫等生理參數(shù)的監(jiān)測(cè),研究TBN在全腦缺血腦卒中大鼠中的長(zhǎng)期藥效學(xué)作用;4.應(yīng)用HE染色、免疫組化、Western blot等技術(shù),探討TBN保護(hù)缺血腦卒中損傷的可能作用機(jī)理,為闡明TBN的藥效學(xué)提供理論基礎(chǔ)。結(jié)果1.在sd永久性缺血腦卒中大鼠模型中,實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)稱量記錄大鼠體重,各組之間大鼠體重在術(shù)后均顯著降低,但組間未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,說(shuō)明在該實(shí)驗(yàn)中tbn對(duì)永久缺血性腦卒中大鼠的體重沒(méi)有影響。實(shí)驗(yàn)采用neurologicalseverityscore法分別在大腦中動(dòng)脈栓塞后3h和24h對(duì)各組大鼠進(jìn)行行為學(xué)評(píng)價(jià),實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:tbn可以有效的改善缺血大鼠的行為、感覺(jué)、平衡、反射功能;缺血24h后,腦組織切片染色可見(jiàn)10mg/kg的tbn、30mg/kg的tbn、90mg/kg的tbn均能顯著減小大鼠的腦梗死面積,保護(hù)率分別為16.64%、14.50%和22.82%。在tbn量效關(guān)系研究中,tbn最低起效劑量為10mg/kg。在tbn治療時(shí)間窗研究中,tbn治療時(shí)間窗可達(dá)6h。在tbn給藥方式研究中,tbn靜脈連續(xù)給藥藥效學(xué)作用優(yōu)于tbn靜脈推注給藥藥效學(xué)作用。2.在sd大鼠缺血再灌注腦卒中模型中,實(shí)驗(yàn)采用rotarod法、longa法以及neurologicalseverityscore三種方法分別對(duì)各組大鼠進(jìn)行行為學(xué)評(píng)價(jià)。rotarod法結(jié)果顯示,10mg/kg的tbn和90mg/kg的tbn在實(shí)驗(yàn)第9天時(shí)均可以顯著的提高缺血大鼠在轉(zhuǎn)棒上的滯留時(shí)間,其中90mg/kg的tbn治療作用與edaravone效能相近,而川芎嗪無(wú)明顯改善作用;longa法結(jié)果顯示,30mg/kg的tbn和90mg/kg的tbn可以有效的改善缺血大鼠行為學(xué)缺失癥狀;neurologicalseverityscore法證明10、30、90mg/kg的tbn在實(shí)驗(yàn)第9天可以有效的綜合改善缺血大鼠的行為、感覺(jué)、平衡、反射功能,其中90mg/kg的tbn從實(shí)驗(yàn)第3天開(kāi)始就能顯著改善腦卒中動(dòng)物neurologicalseverityscore。腦梗死染色可見(jiàn)低、中、高劑量的tbn均能顯著減小大鼠的腦梗死體積,其保護(hù)率分別為21.7%、31.3%、36.3%。10mg/kg的tbn保護(hù)作用與85mg/kg的tmp·hcl保護(hù)作用相當(dāng)(與90mg/kg等摩爾濃度),90mg/kg的tbn保護(hù)作用和edaravone6mg/kg保護(hù)作用相當(dāng),但edaravone6mg/kg劑量是臨床使用劑量的13倍。3.在全腦缺血腦卒中模型中,tbn給藥一周后,實(shí)驗(yàn)采用y迷宮、新物體識(shí)別、步態(tài)分析對(duì)大鼠的學(xué)習(xí)記憶以及運(yùn)動(dòng)功能進(jìn)行評(píng)價(jià),實(shí)驗(yàn)連續(xù)觀察6周。結(jié)果可見(jiàn),無(wú)論是在y迷宮實(shí)驗(yàn)中,還是在新物體實(shí)驗(yàn)中,tbn均能提高全腦缺血腦卒中大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,藥效與臨床一線用藥Memantine藥效相當(dāng);而在步態(tài)分析中,模型組大鼠與假手術(shù)組大鼠相比,未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,TBN組與模型組相比也未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;在病理學(xué)研究中,TBN可以顯著的增加全腦缺血腦卒中大鼠神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目,并能保護(hù)神經(jīng)纖維的損傷。4.TBN作用機(jī)理研究結(jié)果可見(jiàn),在缺血24 h永久性缺血腦卒中模型中,90 mg/kg的TBN可以顯著的降低腦卒中大鼠氧化損傷指標(biāo)4-HNE和8-OHd G的表達(dá),增加永久性缺血腦卒中大鼠半影區(qū)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目,降低神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目。Western blot結(jié)果顯示TBN可以通過(guò)上調(diào)p-Akt通路,從而上調(diào)Bcl-2、下調(diào)Bax、抑制Cyt C釋放、降低Caspase-3和cleaved caspase-3蛋白的表達(dá),從而抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡;TBN可以上調(diào)PSDS95、CNPase、MEF2C蛋白的表達(dá),降低腦卒中大鼠神經(jīng)細(xì)胞軸突和突觸的損傷;TBN還可以通過(guò)促進(jìn)VEGF和MEF2C蛋白的表達(dá),保護(hù)半影區(qū)腦實(shí)質(zhì)內(nèi)的微小血管。在正常大鼠皮層神經(jīng)細(xì)胞線粒體實(shí)驗(yàn)中,TBN可以降低抗霉素A誘導(dǎo)的線粒體內(nèi)自由基的產(chǎn)生以及自由基對(duì)線粒體膜脂質(zhì)氧化損傷,并能顯著抑制CaCl2誘導(dǎo)的線粒體腫脹。結(jié)論1.TBN在永久性缺血腦卒中大鼠、缺血再灌注腦卒中大鼠、全腦缺血腦卒中大鼠中均能顯著的改善神經(jīng)行為學(xué)功能缺損,并能顯著降低腦梗死面積或保護(hù)神經(jīng)原細(xì)胞損傷,其藥效優(yōu)于臨床上使用的依達(dá)拉奉和川芎嗪。TBN最低起效劑量為10 mg/kg,治療時(shí)間窗為6 h。2.TBN可以清除線粒體內(nèi)自由基和抑制線粒體內(nèi)鈣超載,并且可通過(guò)調(diào)控線粒體凋亡通路和MEF2C通路抑制細(xì)胞凋亡,保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞損傷;TBN通過(guò)上調(diào)PSDS95、CNPase、MEF2C蛋白表達(dá),降低腦卒中大鼠神經(jīng)細(xì)胞軸突和突觸的損傷;TBN通過(guò)上調(diào)VEGF和MEF2C蛋白表達(dá),保護(hù)缺血腦卒中半影區(qū)腦實(shí)質(zhì)內(nèi)微小穿支血管。
[Abstract]:Objective To study the pharmacodynamic effects of TBN in cerebral artery of SD rats and to establish a permanent ischemic stroke model . The experimental results showed that tbn of 10 mg / kg and tbn of 90 mg / kg could significantly improve the cerebral infarction area in rats . Conclusion 1 . TBN can significantly improve neurobehavioral deficits in rats with cerebral ischemic stroke , ischemia - reperfusion stroke rats and whole cerebral ischemic stroke .

【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5;R-332
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本文編號(hào)：1449625