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OSAS模型大鼠海馬區(qū)DDHD2和ERC2表達及突觸變化的實驗研究

發(fā)布時間:2018-01-18 12:34

  本文關(guān)鍵詞:OSAS模型大鼠海馬區(qū)DDHD2和ERC2表達及突觸變化的實驗研究 出處:《遵義醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文 論文類型:學(xué)位論文


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【摘要】:目的:監(jiān)測阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征(Obstructive sleep apnea syndrome,OSAS)模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力變化。檢測實驗大鼠海馬區(qū)DDHD2及ERC2蛋白的表達變化,并觀察突觸前活動區(qū)超微結(jié)構(gòu)變化。方法:22只雄性SD大鼠隨機分為正常對照組與OSAS模型組,每組11只。通過設(shè)置慢性間歇性缺氧(Chronic intermittent hypoxia,CIH)環(huán)境,模擬OSAS過程,建立大鼠實驗?zāi)P汀S肕orris水迷宮(Morris water maze,MWM)觀察實驗大鼠空間學(xué)習(xí)與記憶能力變化;使用蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot,WB)觀察實驗大鼠海馬區(qū)DDHD2及ERC2蛋白的表達變化;并通過免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,I HC)法觀察DDHD2及ERC2在海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞的表達定位。最后在透射電鏡下,觀察突觸前活動區(qū)超微結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果:OSAS模型建立評估:與常氧環(huán)境比較,低氧環(huán)境中的OSAS實驗大鼠出現(xiàn)了活動減少、睡眠增多、呼吸頻率加快及抬頭呼吸等缺氧表現(xiàn)。同時監(jiān)測低氧環(huán)境中大鼠尾動脈血氧飽和度(Sp O2)波動在69%至82%之間,常氧環(huán)境中Sp O2波動在96%至100%之間。MWM結(jié)果:定位航行試驗中兩組實驗大鼠的逃避潛伏期隨著每天重復(fù)訓(xùn)練的增加而不斷縮短。正常對照組為(第1天39.4±11.0,第2天32.4±7.9,第3天17.4±5.9,第4天11.4±4.8,第5天8.0±3.1);OSAS模型組為(第1天46.8±12.4,第2天43.6±10.7,第3天32.3±9.5,第4天26.6±8.1,第5天22.1±7.1)。不同天數(shù)模型組逃避潛伏期均較正常組延長,兩組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)?臻g探索試驗:實驗大鼠穿越原目標(biāo)平臺的次數(shù)為(正常對照組5.3±2.1,OSAS模型組3.1±1.7),結(jié)果表明模型組大鼠穿越原目標(biāo)平臺的次數(shù)較正常組減少,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);在目標(biāo)象限的時間百分比為(正常對照組31.5±5.6,OSAS模型組24.2±7.1),結(jié)果顯示模型組大鼠在目標(biāo)象限的時間百分比較正常組降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Western Blot結(jié)果:OSAS模型大鼠海馬區(qū)DDHD2蛋白表達的灰度值較正常組增高(正常組1.03±0.39,OSAS模型組1.47±0.37);模型組ERC2蛋白表達的灰度值較正常組降低(正常組0.50±0.20,OSAS模型組0.29±0.14),差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。免疫組化法觀察到DDHD2在兩組實驗大鼠海馬CA1區(qū)的神經(jīng)細胞胞漿及胞核內(nèi)表達,ERC2在實驗大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞胞漿內(nèi)表達。透射電鏡結(jié)果:模型組大鼠海馬CA1區(qū)突觸前活動區(qū)長度減少(正常組0.30±0.05,OSAS模型組0.21±0.06),與正常組比較有顯著差異(P0.01)。結(jié)論:CIH模擬OSAS所建立的實驗動物模型,出現(xiàn)了學(xué)習(xí)、記憶能力等認知功能障礙及突觸前超微結(jié)構(gòu)變化,其可能與伴隨的DDHD2過表達和ERC2的表達降低有關(guān)。
[Abstract]:Objective: to monitor obstructive sleep apnea syndrome in obstructive sleep apnea syndrome (OSAS). The changes of spatial learning and memory ability and the expression of DDHD2 and ERC2 in hippocampal region of experimental rats were detected. Methods 22 male Sprague-Dawley rats were randomly divided into normal control group and OSAS model group. 11 rats in each group were used to simulate the OSAS process by setting up chronic intermittent hypoxia (Chronic intermittent hypoxiaicus) environment. Morris water maze was used to observe the changes of spatial learning and memory ability of experimental rats. The expression of DDHD2 and ERC2 in hippocampal region of experimental rats was observed by Western blotblotWB (Western blotting). Immunohistochemical method was used. The expression and localization of DDHD2 and ERC2 in hippocampal CA1 neurons were observed by I-HCI method. Finally, transmission electron microscopy was used. Results: compared with normoxic environment, OSAS rats in hypoxic environment showed decreased activity and increased sleep. The oxygen saturation of caudal artery in hypoxic environment was monitored from 69% to 82%. SPO _ 2 fluctuates between 96% and 100% in normoxic environment. MWM results:. The escape latency of the two groups decreased with the increase of daily repeated training. On day 1, 39.4 鹵11.0. 32.4 鹵7.9 on the second day, 17.4 鹵5.9 on the third day, 11.4 鹵4.8 on the fourth day, 8.0 鹵3.1 on the fifth day. The OSAS model group was 46.8 鹵12.4 on the first day, 43.6 鹵10.7 on the second day, 32.3 鹵9.5 on the third day and 26.6 鹵8.1 on the fourth day. On the 5th day, the escape latency of the model group was longer than that of the normal group. The difference between the two groups was statistically significant (P 0.05). Space exploration test: the number of experimental rats crossing the original target platform was 5.3 鹵2.1 (normal control group). The results showed that the number of crossing the original target platform in the model group was less than that in the normal group, and the difference was statistically significant (P 0.05). The percentage of time in the target quadrant was 24.2 鹵7.1 in the normal control group (31.5 鹵5.6). The results showed that the percentage of time in the target quadrant of the model group was lower than that of the normal group. The difference was statistically significant (P 0.05). Western Blot results showed that the gray level of DDHD2 protein expression in the hippocampus of the rats with 1% OSAS was higher than that of the normal group (2). Normal group 1.03 鹵0.39. OSAS model group (1.47 鹵0.37); The expression of ERC2 protein in the model group was significantly lower than that in the normal group (0.50 鹵0.20 鹵0.29 鹵0.14). The difference was statistically significant (P 0.05). The expression of DDHD2 in the cytoplasm and nucleus of hippocampal CA1 of the two groups was observed by immunohistochemical method. The results of transmission electron microscope showed that the length of presynaptic active area in CA1 region of hippocampus of model group was decreased (0. 30 鹵0. 05). There was significant difference between OSAS model group and normal group (0.21 鹵0.06). Conclusion the experimental animal model established by OSAS simulated by OSAS has appeared learning. Cognitive impairment such as memory ability and ultrastructural changes in presynaptic process may be related to the overexpression of DDHD2 and the decrease of ERC2 expression.
【學(xué)位授予單位】:遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類號】:R766;R-332

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本文編號:1441003

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