本文關(guān)鍵詞：人14-3-3σ基因啟動子熒光素酶報告基因載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)錄活性分析　出處：《現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)》2013年01期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的構(gòu)建人14-3-3σ基因啟動子的熒光素酶報告基因載體,探討該啟動子的轉(zhuǎn)錄活性。方法運(yùn)用UCSC軟件對人14-3-3σ基因5′端2000bp進(jìn)行啟動子特征分析和轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)分析�？寺�14-3-3σ基因5′端5個不同長度的啟動子片段,與熒光素酶報告基因載體pGL3-Basic重組,獲得5個不同長度的14-3-3σ啟動子螢光素酶報告基因載體,分別轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞,通過雙熒光素酶活性分析實(shí)驗(yàn)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄活性分析。將轉(zhuǎn)錄因子AP-2α的過表達(dá)質(zhì)粒pCMV-Myc/AP-2α分別與以上不同長度的14-3-3σ啟動子螢光素酶報告基因載體共轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞,通過雙熒光素酶活性分析實(shí)驗(yàn)檢測AP-2α對14-3-3σ啟動子轉(zhuǎn)錄活性的影響。結(jié)果序列分析發(fā)現(xiàn)人14-3-3σ啟動子基因5′端1349bp的區(qū)域內(nèi)存在多個潛在的AP-2α結(jié)合位點(diǎn),成功構(gòu)建了5個不同長度的14-3-3σ啟動子報告基因載體。雙熒光素酶活性分析顯示5個啟動子片段均有轉(zhuǎn)錄活性,AP-2α可增強(qiáng)14-3-3σ啟動子轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)論成功構(gòu)建了14-3-3σ啟動子的報告基因載體,為進(jìn)一步研究AP-2α對14-3-3σ的調(diào)控奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to construct the luciferase reporter gene vector of human 14-3-3 蟽 gene promoter. Methods the promoter characteristics and transcription factor binding sites of human 14-3-3 蟽 gene 5'terminal 2000bp were analyzed by UCSC software. 3 蟽 gene 5 'end of five different lengths of promoter fragments. After recombination with luciferase reporter gene vector pGL3-Basic, five different length 14-3-3 蟽 promoter luciferase reporter gene vectors were obtained and transfected into HeLa cells. The transcriptional activity was analyzed by double luciferase activity analysis. The overexpression plasmid pCMV-Myc/AP-2 偽 of transcription factor AP-2 偽 was linked with 14-3-3 蟽 of the above length. Motility luciferase reporter gene vector was co-transfected into HeLa cells. The effect of AP-2 偽 on the transcriptional activity of 14-3-3 蟽 promoter was detected by double luciferase assay. There are many potential AP-2 偽 binding sites in the region. Five different length 14-3-3 蟽 promoter reporter gene vectors were successfully constructed. The results of double luciferase activity analysis showed that all the five promoter fragments had transcriptional activity. AP-2 偽 can enhance the transcriptional activity of 14-3-3 蟽 promoter. Conclusion the reporter gene vector of 14-3-3 蟽 promoter was constructed successfully. It lays a foundation for further study on the regulation of 14-3-3 蟽 by AP-2 偽.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)院預(yù)防醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心;廣東醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院勞動衛(wèi)生與環(huán)境衛(wèi)生教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31070687) 廣東省自然科學(xué)基金(9451051501002535)
【分類號】：R346
【正文快照】： 14-3-3σ基因是一種腫瘤抑制基因,受到P53調(diào)控,由14-3-3σ基因編碼的14-3-3σ蛋白是一種上皮特異性標(biāo)記物,主要分布于上皮細(xì)胞,正常組織中鱗狀上皮14-3-3σ表達(dá)最強(qiáng)。14-3-3σ蛋白可與多種信號蛋白包括激酶、磷酸酶或跨膜蛋白等相互作用,在細(xì)胞周期調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞分化

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1434748