本文關(guān)鍵詞：靶向LOX-1基因RNAi慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定　出處：《中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào)》2013年07期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： LOX- 慢病毒載體 RNA干擾 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 凋亡

【摘要】：該研究針對(duì)LOX-1基因(OLR1)設(shè)計(jì)并合成3條siRNA干擾序列,與雙酶切的U6-vshR-NA-CMV-GFP慢病毒載體連接得到重組載體,包裝慢病毒并測(cè)定滴度。采用最佳MOI值及轉(zhuǎn)染條件,轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC),轉(zhuǎn)染96 h后通過RT-PCR和Western blot檢測(cè)LOX-1 mRNA及蛋白的表達(dá),流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染后ox-LDL誘導(dǎo)HUVEC的凋亡情況。測(cè)序證實(shí)靶向LOX-1 RNAi慢病毒載體構(gòu)建成功;RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后LOX-1 mRNA及蛋白均受到不同程度抑制(P0.05);流式檢測(cè)結(jié)果顯示抑制LOX-1表達(dá)后ox-LDL誘導(dǎo)HUVEC凋亡顯著減少(P0.05)。該研究應(yīng)用RNAi技術(shù)成功構(gòu)建LOX-1 RNAi慢病毒載體,有效抑制了LOX-1的表達(dá),顯著減少了ox-LDL誘導(dǎo)的凋亡,為進(jìn)一步研究LOX-1基因沉默減輕內(nèi)皮細(xì)胞損傷及相應(yīng)保護(hù)機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In this study, three siRNA interference sequences were designed and synthesized for LOX-1 gene. The recombinant vector was obtained by ligating with the double digested U6-vshR-NA-CMV-GFP lentivirus vector to package the lentivirus and determine the titer. The optimal MOI value and transfection conditions were used. Human umbilical vein endothelial cells were transfected into human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). After transfection for 96 h, the expression of LOX-1 mRNA and protein was detected by RT-PCR and Western blot. Flow cytometry was used to detect the apoptosis of HUVEC induced by ox-LDL. Sequencing confirmed that the lentivirus vector targeting LOX-1 RNAi was successfully constructed. The results of RT-PCR and Western blot showed that LOX-1 mRNA and protein were inhibited in different degree after transfection. Flow cytometry showed that HUVEC apoptosis induced by ox-LDL was significantly reduced by inhibiting LOX-1 expression (P 0.05). In this study, LOX-1 RNAi lentivirus vector was successfully constructed by using RNAi technique. It effectively inhibited the expression of LOX-1 and significantly reduced the apoptosis induced by ox-LDL, which laid a foundation for the further study of LOX-1 gene silencing to alleviate the injury of endothelial cells and the corresponding protective mechanism.
【作者單位】： 遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院心內(nèi)科;遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院組織工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：遼寧省科技廳社會(huì)發(fā)展攻關(guān)計(jì)劃(批準(zhǔn)號(hào):2011225015) 遼寧醫(yī)學(xué)院校長基金—奧鴻博澤研究生科研創(chuàng)新基金資助的課題~~
【分類號(hào)】：R341;Q78
【正文快照】： 正常情況下,凝集素樣氧化性低密度脂蛋白受體-1(lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1)在內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等有少量表達(dá),可被氧化性低密度脂蛋白(oxi-dized low density lipoprotein,ox-LDL)、血管緊張素II(angiotensin II,Ang II)

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本文編號(hào)：1423782