本文關(guān)鍵詞：B7-H3Ig重組蛋白的真核表達及其對T細胞的作用　出處：《細胞與分子免疫學(xué)雜志》2013年01期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的真核表達人B7-H3Ig重組蛋白,探討B(tài)7-H3信號在T細胞中的作用。方法重疊PCR方法構(gòu)建B7-H3Ig重組基因,進而獲得重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pGEZ-Term/B7-H3Ig,轉(zhuǎn)染L929細胞建立L929/B7-H3Ig基因轉(zhuǎn)染細胞株,純化獲得B7-H3Ig重組蛋白。體外激發(fā)型CD3單克隆抗體(mAb)刺激活化T細胞過程中加入B7-H3Ig,觀察其對T細胞增殖以及IL-10與IFN-γ分泌的作用。結(jié)果 B7-H3Ig經(jīng)Protein G柱純化后純度90%,濃度達0.559 mg/mL。重組蛋白結(jié)合實驗表明CD3 mAb刺激48 h后T細胞表面B7-H3受體表達達到高峰。B7-H3Ig以劑量依賴方式促進CD3 mAb誘導(dǎo)的T細胞體外增殖與IL-10和IFN-γ分泌。結(jié)論成功建立真核表達人B7-H3Ig基因轉(zhuǎn)染細胞株,B7-H3Ig協(xié)同刺激T細胞增殖與IL-10和IFN-γ分泌。
[Abstract]:Objective to express human B7-H3Ig recombinant protein and investigate the role of B7-H3 signal in T cells. Methods B7-H3Ig recombinant gene was constructed by overlapping PCR method. Then the recombinant retrovirus vector pGEZ-Term / B7-H3 IgA was obtained, and the L929 / B7-H3Ig gene was transfected into L929 cells to establish the L929 / B7-H3Ig gene transfected cell line. B7-H3Ig recombinant protein was purified, and B7-H3Ig was added to activated T cells stimulated by CD3 monoclonal antibody (mAb) in vitro. The effects of B7-H3Ig on the proliferation of T cells and the secretion of IL-10 and IFN- 緯 were observed. Results the purity of B7-H3Ig was 90% after being purified by Protein G column. The concentration of recombinant protein was 0.559 mg / mL. The recombinant protein binding test showed that CD3 mAb stimulated 48. Peak expression of B7-H3 receptor on T cells after h. B7-H3Ig enhanced CD3 in a dose-dependent manner. MAb induced T cell proliferation and IL-10 and IFN- 緯 secretion in vitro. Conclusion Eukaryotic expression of human B7-H3Ig gene transfected cell line was successfully established. B7-H3Ig co-stimulates T cell proliferation and IL-10 and IFN- 緯 secretion.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗科;蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)生物技術(shù)研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(30901789) 安徽省高校省級自然科學(xué)基金(KJ2011B072)
【分類號】：R392.1
【正文快照】： B7-H3是CD28-B7家族成員,小鼠B7-H3僅有2IgB7-H3一種形式[1],人B7-H3有2種不同形式的剪切體:2IgB7-H3和4IgB7-H3,以后者為主要存在形式[2]。B7-H3蛋白表達于體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的樹突狀細胞(dendritic cells,DC)、組織巨噬細胞以及活化的外周血單核細胞[2-4],在多種腫瘤組織包括肺

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