本文關(guān)鍵詞：單純皰疹病毒1型糖蛋白D主要抗原表位區(qū)的表達、純化及鑒定　出處：《基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床》2013年03期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的原核表達單純皰疹病毒1型(HSV-1)糖蛋白D(gD)主要抗原表位區(qū),純化融合表達蛋白并對其進行鑒定。方法用Lasergene7.0中Protean軟件對HSV-1 gD氨基酸序列進行抗原表位預(yù)測和分析,篩選出gD主要抗原表位區(qū)(gD MED),人工合成該區(qū)域cDNA序列,構(gòu)建原核表達載體pET-GST-gD MED;將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌(E.coli)BL21(DE3)pLysS,用異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達,通過GST.Bind純化試劑盒對gDMED融合蛋白進行純化;Western blot對gD MED融合蛋白的免疫活性進行分析。結(jié)果 HSV-1 gD在266～394區(qū)域富含抗原表位,人工合成了該區(qū)域的cDNA序列,并成功構(gòu)建了原核表達載體pET-GST-gD MED;gD MED融合蛋白主要以可溶形式表達,分子質(zhì)量約為45 ku,純度能達95%;Western blot結(jié)果顯示,gD MED融合蛋白能與感染HSV-1患者的血清發(fā)生特異結(jié)合。結(jié)論成功表達和純化了具有良好抗原性的HSV-1 gD MED融合蛋白,為HSV免疫診斷試劑盒和基因工程疫苗的研制提供了依據(jù)。
[Abstract]:Objective to prokaryotic expression of herpes simplex virus type 1 (HSV-1) glycoprotein D (gD) main antigen epitope fusion protein, purification and identification of the methods by Protean software Lasergene7.0 for epitope prediction and analysis of HSV-1 gD amino acid sequence selected from the gD main antigenic region (gD MED) the region, synthetic cDNA sequences, construct the prokaryotic expression vector pET-GST-gD MED; the recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli (E.coli) BL21 (DE3) pLysS, using isopropyl beta -D- thio galactopyranoside (IPTG) induced expression of gDMED fusion protein was purified by GST.Bind purification kit; Western blot gD MED the immunological activity of the fusion protein were analyzed. The results of HSV-1 gD in 266 ~ 394 region rich in epitope, synthetic cDNA sequences of the region, and successfully constructed the prokaryotic expression vector pET-GST-gD MED; gD MED fusion protein could be mainly Soluble expression, molecular mass is about 45 Ku, the purity can reach 95%; Western blot showed that gD MED fusion protein and serum in patients with HSV-1 infection occurred. Conclusion the specific binding was successfully expressed and purified with good antigenicity of HSV-1 gD fusion protein of MED, provides a theoretical basis for developing immune diagnosis kit and HSV gene engineering vaccine.

【作者單位】： 北京大學(xué)人民醫(yī)院檢驗科;北京大學(xué)工學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程系;
【分類號】：R392.1
【正文快照】： 單純皰疹病毒(herpes simplex virus type,HSV)屬于皰疹病毒科α-亞科,是雙鏈DNA病毒。感染HSV可導(dǎo)致皰疹性腦炎、生殖器皰疹和宮頸癌等多種疾病,是可導(dǎo)致胎兒先天性畸形和死亡的病原體之一[1]。目前,病毒培養(yǎng)被認為是HSV原發(fā)性感染早期診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”[2]。但是,在感染的恢

【參考文獻】

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【二級參考文獻】

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本文編號：1405552