本文關(guān)鍵詞：無莢膜流感嗜血桿菌DNA通過STING信號通路誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的初步研究　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:探究無莢膜流感嗜血桿菌DNA(NTHI-DNA)在NTHI誘導(dǎo)免疫應(yīng)答中的作用,并對其應(yīng)答機制進(jìn)行研究。背景:無莢膜流感嗜血桿菌(NTHI)是一種常見的革蘭陰性菌,正常情況下,作為條件致病菌定植于上呼吸道,但當(dāng)免疫力低下時可以移行至下呼吸道,誘發(fā)感染性疾病。一直以來,NTHI作為胞外菌被人們所熟知;但現(xiàn)有研究證實,NTHI也可以內(nèi)化進(jìn)入細(xì)胞。內(nèi)化的細(xì)菌可以躲避高濃度的抗生素,這是中耳炎和慢性阻塞性肺疾病(COPD)加重的重要原因。在肺炎鏈球菌、李斯特菌、結(jié)核分枝桿菌等多個感染模型中已證實細(xì)菌DNA可以被胞內(nèi)DNA識別受體所識別進(jìn)而誘導(dǎo)一系列信號通路開放,其中干擾素刺激基因(STING)介導(dǎo)的I型干擾素(I-IFN)產(chǎn)生是DNA免疫中最典型的信號通路。目前尚未有NTHI-DNA可以誘導(dǎo)機體免疫應(yīng)答的報道。因此,本研究我們將對NTHI-DNA通過STING信號通路誘導(dǎo)I-IFN產(chǎn)生的機制進(jìn)行探究。主要研究方法1.采用抗生素保護(hù)實驗(APA)檢測NTHI感染后,IFN-β和CXCL10的表達(dá),了解內(nèi)化NTHI誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的能力;提取NTHI-DNA分別刺激上皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,并檢測I-IFN和CXCL10的表達(dá),初步證實NTHI-DNA作為免疫刺激物可誘導(dǎo)機體免疫應(yīng)答。2.初步檢測NTHI感染后細(xì)胞中幾種常見DNA識別受體的表達(dá);干擾RNA(si RNA)特異性敲低MEF細(xì)胞中c GAS的表達(dá),檢測c GAS對內(nèi)化NTHI及NTHI-DNA誘導(dǎo)I-IFN及CXCL10的影響。3.分別比較NTHI-DNA刺激下,STING野生細(xì)胞(MEFWT)與STING缺陷細(xì)胞(MEFSTING-/-)以及HEK293T細(xì)胞中空載組與過表達(dá)STING組誘導(dǎo)IFN-β及CXCL10的差異,證實STING在NTHI-DNA介導(dǎo)免疫應(yīng)答中的作用。比較NTHI-DNA刺激后,HEK293T細(xì)胞中空載組、過表達(dá)TBK1組、過表達(dá)TBK1(ΔULD)組誘導(dǎo)IFN-β及CXCL10的差異,明確TBK1在NTHI-DNA誘導(dǎo)免疫應(yīng)答中扮演的角色。NTHI-DNA刺激下,采用免疫熒光技術(shù)檢測細(xì)胞核內(nèi)p-IRF3的表達(dá);比較HEK293T細(xì)胞中空載組與過表達(dá)IRF3組誘導(dǎo)IFN-β及CXCL10的差異,了解IRF3對NTHI-DNA誘導(dǎo)免疫答的影響。主要實驗結(jié)果1.內(nèi)化NTHI及NTHI-DNA均可誘導(dǎo)I-IFN及CXCL10表達(dá)上調(diào),且在RAW264.7細(xì)胞中觀察到,NTHI-DNA誘導(dǎo)I-IFN及CXCL10具有時間依賴性。2.DNA受體檢測結(jié)果顯示:NTHI感染后,BEAS-2B細(xì)胞中c GAS和IFI16的表達(dá)上調(diào);并且c GAS的表達(dá)與內(nèi)化進(jìn)入胞內(nèi)的NTHI數(shù)量成正比。si RNA特異性敲低c GAS后,會抑制內(nèi)化NTHI及NTHI-DNA誘導(dǎo)I-IFN的表達(dá)。3.相比于STING野生細(xì)胞(MEFWT),STING缺陷細(xì)胞(MEFSTING-/-)誘導(dǎo)I-IFN及CXCL10的能力被顯著抑制。與空載組相比較,HEK293T過表達(dá)STING可以促進(jìn)IFN-β的表達(dá);過表TBK1后IFN-β和CXCL10的表達(dá)也顯著上調(diào),然而過表達(dá)TBK1(ΔULD)對IFN-β和CXCL10并無顯著影響。免疫熒光結(jié)果顯示,NTHI-DNA可以誘導(dǎo)細(xì)胞核內(nèi)的p-IRF3表達(dá)上調(diào);過表達(dá)IRF3能夠上調(diào)NTHI-DNA介導(dǎo)的IFN-β�？偨Y(jié)與討論胞內(nèi)NTHI-DNA通過STING信號通路誘導(dǎo)上皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生I-IFN和CXCL10;結(jié)合內(nèi)化NTHI也可誘導(dǎo)IFN-β和CXCL10上調(diào)的結(jié)果,我們認(rèn)為NTHI-DNA通過STING信號通路介導(dǎo)的免疫應(yīng)答可能參與NTHI感染的發(fā)生發(fā)展。該研究有助于加深我們對NTHI與宿主免疫相互作用的認(rèn)識,為尋找針對NTHI預(yù)防和治療新方法提供理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective : To investigate the role of NTHI - DNA in immune response induced by NTHI . The results showed that NTHI - DNA could induce the up - regulation of IFN - 尾 and CXCL10 . The results showed that NTHI - DNA could induce the development of IFN - 尾 and CXCL10 . The results suggested that NTHI - DNA could be involved in the development of NTHI infection .

【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R378

【參考文獻(xiàn)】

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