本文關鍵詞：骨髓造血干祖細胞微環(huán)境的形成　出處：《蘇州大學》2016年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的：造血干細胞(Hematopoietic stem cells, HSC)是最早被研究和利用的成體干細胞之一。由于體內HSC的命運取決于其與其所在的骨髓HSC微環(huán)境(niche)間復雜而動態(tài)的分子信號交流,因此,進一步解析機體造血調控的機制,以及如何在體外大量擴增HSC,同時維持其自我更新和多向分化的潛能,至今仍是血液學研究領域中的重要問題。1978年,Ray Schofield首次揭示了骨髓niche對于HSC的重要調控作用。此后,逐步發(fā)展的實驗技術和實驗手段使人們能夠去研究niche結構生物學,不同niche組分的特定功能,以及其在血液疾病發(fā)生發(fā)展過程中的作用。目前研究發(fā)現(xiàn),骨髓niche主要有骨內膜niche和血管周niche兩大類,但是對于構成骨髓niche的細胞組分來源知之甚少。本課題旨在探究構成骨髓niche細胞的來源,以及細胞自噬在其中的作用。具體目標：(1)明確骨髓移植前致死劑量輻照對骨髓niche的破壞作用；(2)探究供體造血干祖細胞是否參與移植后受體骨髓niche的重建；(3)探究造血干祖細胞的正常自噬功能對骨髓niche形成的影響。方法：(1)給予野生型小鼠9 Gy致死劑量60Co伽馬射線全身輻照,采用流式檢測小鼠骨髓中造血細胞以及非造血的骨髓微環(huán)境細胞的比例以及數(shù)量變化情況,并通過CCK-8檢測輻照對骨髓單個核細胞的生存活力的影響。(2)采用具有自噬基因標記的Atg7f/f;GFP-LC3小鼠作為供體,分選骨髓LSK造血干祖細胞移植至WT小鼠體內,同時設置反向移植對照實驗。造血重建后流式檢測是否存在骨髓niche的重建,并流式檢測GFP陽性細胞比例以及基因型鑒定檢測骨髓niche重建的細胞來源。(3)采用Micro-CT掃描、流式細胞術、骨髓切片HE染色、免疫組化、實時熒光定量RT-PCR技術檢測造血干祖細胞功能異常(Atg7f/f;Vav-Cre小鼠)對骨髓niche結構、細胞組分、功能的影響。(4)采用競爭性移植實驗檢測造血干祖細胞功能異常對骨髓niche形成的影響；并將野生型小鼠骨髓移植到Atg7f/f;Vav-Cre小鼠體內進行挽救實驗,通過流式細胞術、集落形成實驗檢測造血干祖細胞重建骨髓niche的能力。結果：(1)9 Gy致死劑量輻照不僅能夠清除骨髓中的有核造血細胞,也能夠對骨髓niche包括基質細胞、CAR細胞、內皮細胞在內的骨髓niche細胞產生顯著的殺傷作用。(2)骨髓移植造血重建的過程中同樣存在非造血的骨髓niche的重建,并且重建的細胞可以來源于供體的LSK造血干祖細胞細胞。(3)造血干祖細胞功能缺陷會導致小鼠骨髓niche的結構、細胞組分以及功能的異常。(4)造血干祖細胞自噬功能缺陷會導致其形成骨髓niche基質細胞、內皮細胞的能力受阻。(5)造血干祖細胞具有重建骨髓niche的能力,并且這一能力依賴于正常的自噬功能。結論：在成體小鼠中,LSK造血干祖細胞能夠形成骨髓中包括基質細胞、內皮細胞等在內的niche細胞,造血干祖細胞與骨髓微環(huán)境的功能相互依存,并且造血干祖細胞重建niche的能力依賴于細胞自噬。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of bone marrow transplantation on bone marrow mononuclear cells ( HSCs ) . ( 4 ) hematopoietic stem progenitor cells have the ability to reconstruct bone marrow stromal cells and endothelial cells .

【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R329.2

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