本文關(guān)鍵詞：骨髓造血干祖細(xì)胞微環(huán)境的形成　出處：《蘇州大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的：造血干細(xì)胞(Hematopoietic stem cells, HSC)是最早被研究和利用的成體干細(xì)胞之一。由于體內(nèi)HSC的命運(yùn)取決于其與其所在的骨髓HSC微環(huán)境(niche)間復(fù)雜而動(dòng)態(tài)的分子信號(hào)交流,因此,進(jìn)一步解析機(jī)體造血調(diào)控的機(jī)制,以及如何在體外大量擴(kuò)增HSC,同時(shí)維持其自我更新和多向分化的潛能,至今仍是血液學(xué)研究領(lǐng)域中的重要問題。1978年,Ray Schofield首次揭示了骨髓niche對(duì)于HSC的重要調(diào)控作用。此后,逐步發(fā)展的實(shí)驗(yàn)技術(shù)和實(shí)驗(yàn)手段使人們能夠去研究niche結(jié)構(gòu)生物學(xué),不同niche組分的特定功能,以及其在血液疾病發(fā)生發(fā)展過程中的作用。目前研究發(fā)現(xiàn),骨髓niche主要有骨內(nèi)膜niche和血管周niche兩大類,但是對(duì)于構(gòu)成骨髓niche的細(xì)胞組分來源知之甚少。本課題旨在探究構(gòu)成骨髓niche細(xì)胞的來源,以及細(xì)胞自噬在其中的作用。具體目標(biāo)：(1)明確骨髓移植前致死劑量輻照對(duì)骨髓niche的破壞作用；(2)探究供體造血干祖細(xì)胞是否參與移植后受體骨髓niche的重建；(3)探究造血干祖細(xì)胞的正常自噬功能對(duì)骨髓niche形成的影響。方法：(1)給予野生型小鼠9 Gy致死劑量60Co伽馬射線全身輻照,采用流式檢測(cè)小鼠骨髓中造血細(xì)胞以及非造血的骨髓微環(huán)境細(xì)胞的比例以及數(shù)量變化情況,并通過CCK-8檢測(cè)輻照對(duì)骨髓單個(gè)核細(xì)胞的生存活力的影響。(2)采用具有自噬基因標(biāo)記的Atg7f/f;GFP-LC3小鼠作為供體,分選骨髓LSK造血干祖細(xì)胞移植至WT小鼠體內(nèi),同時(shí)設(shè)置反向移植對(duì)照實(shí)驗(yàn)。造血重建后流式檢測(cè)是否存在骨髓niche的重建,并流式檢測(cè)GFP陽(yáng)性細(xì)胞比例以及基因型鑒定檢測(cè)骨髓niche重建的細(xì)胞來源。(3)采用Micro-CT掃描、流式細(xì)胞術(shù)、骨髓切片HE染色、免疫組化、實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)造血干祖細(xì)胞功能異常(Atg7f/f;Vav-Cre小鼠)對(duì)骨髓niche結(jié)構(gòu)、細(xì)胞組分、功能的影響。(4)采用競(jìng)爭(zhēng)性移植實(shí)驗(yàn)檢測(cè)造血干祖細(xì)胞功能異常對(duì)骨髓niche形成的影響；并將野生型小鼠骨髓移植到Atg7f/f;Vav-Cre小鼠體內(nèi)進(jìn)行挽救實(shí)驗(yàn),通過流式細(xì)胞術(shù)、集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)造血干祖細(xì)胞重建骨髓niche的能力。結(jié)果：(1)9 Gy致死劑量輻照不僅能夠清除骨髓中的有核造血細(xì)胞,也能夠?qū)撬鑞iche包括基質(zhì)細(xì)胞、CAR細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞在內(nèi)的骨髓niche細(xì)胞產(chǎn)生顯著的殺傷作用。(2)骨髓移植造血重建的過程中同樣存在非造血的骨髓niche的重建,并且重建的細(xì)胞可以來源于供體的LSK造血干祖細(xì)胞細(xì)胞。(3)造血干祖細(xì)胞功能缺陷會(huì)導(dǎo)致小鼠骨髓niche的結(jié)構(gòu)、細(xì)胞組分以及功能的異常。(4)造血干祖細(xì)胞自噬功能缺陷會(huì)導(dǎo)致其形成骨髓niche基質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞的能力受阻。(5)造血干祖細(xì)胞具有重建骨髓niche的能力,并且這一能力依賴于正常的自噬功能。結(jié)論：在成體小鼠中,LSK造血干祖細(xì)胞能夠形成骨髓中包括基質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等在內(nèi)的niche細(xì)胞,造血干祖細(xì)胞與骨髓微環(huán)境的功能相互依存,并且造血干祖細(xì)胞重建niche的能力依賴于細(xì)胞自噬。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of bone marrow transplantation on bone marrow mononuclear cells ( HSCs ) . ( 4 ) hematopoietic stem progenitor cells have the ability to reconstruct bone marrow stromal cells and endothelial cells .

【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R329.2

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本文編號(hào)：1387109