本文關鍵詞：幽門螺桿菌HspA乳酸菌疫苗構建及免疫反應性鑒定　出處：《中國公共衛(wèi)生》2013年07期 　論文類型：期刊論文

  更多相關文章： 幽門螺桿菌(Hp) 乳酸乳球菌 原核表達系統(tǒng)(NICE) 熱休克蛋白A(HspA)

【摘要】：目的探討幽門螺桿菌(Hp)熱休克蛋白A(HspA)在食品級乳酸乳球菌NZ3900菌株中的克隆表達及免疫反應性。方法利用基因重組技術構建乳酸乳球菌重組子NZ3900/pNZ8110-hspA;繪制生長曲線,觀察hs-pA插入對乳酸乳球菌重組子生長影響及乳酸鏈球菌素(Nisin)對重組子生長影響;采用鈉十二烷基硫酸鹽-聚丙烯酰胺凝膠電泳法(SDS-PAGE)檢測HspA在乳酸乳球菌中的表達;應用western-blot鑒定重組子表達HspA的免疫反應性。結(jié)果成功擴增出幽門螺桿菌河南分離株(MEL-Hp27)的hspA基因,構建了hspA基因的乳酸乳球菌原核表達系統(tǒng)(NICE);細菌生長曲線顯示hspA的插入未對乳酸乳球菌重組子的生長產(chǎn)生影響,除10 ng/mL Nisin對重組子生長影響較小外,20～100 ng/mL nisin對重組子的生長均有明顯抑制;SDS-PAGE和Tricine SDS-PAGE檢測均未觀察到HspA條帶;western-blot鑒定結(jié)果顯示乳酸乳球菌表達的HspA抗原蛋白具有良好免疫反應性。結(jié)論HspA在乳酸乳球菌中的少量表達影響重組菌生長。
[Abstract]:Objective to study the heat shock protein (HPA) of Helicobacter pylori (HP). Methods the recombinant NZ3900 / pNZ8110-hspA was constructed by gene recombination technique. The growth curve was drawn to observe the effect of hs-pA insertion on the growth of Lactococcus lactis recombinant and the effect of nisin on the growth of the recombinant. The expression of HspA in Lactococcus lactis was detected by sodium 12 alkyl sulfate and polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Western-blot was used to identify the immunoreactivity of the recombinant HspA. Results the hspA gene of Helicobacter pylori Henan isolate (MEL-Hp27) was successfully amplified. The prokaryotic expression system of hspA gene for Lactococcus lactis was constructed. The bacterial growth curve showed that the insertion of hspA had no effect on the growth of Lactococcus lactis recombinant, except that 10 ng/mL Nisin had little effect on the growth of the recombinant. 20 ng/mL nisin significantly inhibited the growth of the recombinant plasmid. No HspA bands were observed by SDS-PAGE and Tricine SDS-PAGE. Western-blot analysis showed that the HspA antigen expressed by Lactococcus lactis had a good immunoreactivity. Conclusion A small amount of HspA expression in Lactococcus lactis affects the growth of recombinant bacteria.
【作者單位】： 河南科技大學醫(yī)學院病原生物學教研室;鄭州大學公共衛(wèi)生學院流行病學教研室;鄭州大學基礎醫(yī)學院寄生蟲學教研室;
【基金】：中國博士后科學基金(200801273)
【分類號】：R392
【正文快照】： 乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)是一種革蘭陽性食品級細菌,通常被認為是安全的,已經(jīng)在乳制品發(fā)酵工業(yè)方面應用多年。原核表達系統(tǒng)(nisin-controlled expression,NICE)是目前最有效的食品級誘導表達系統(tǒng),以乳酸鏈球菌素(nisin)作為誘導信號,已成功應用于多種菌株,包

【參考文獻】

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