本文關(guān)鍵詞：依賴FMN的硝基還原酶Rv3368c的晶體結(jié)構(gòu)學(xué)和功能學(xué)研究　出處：《山東大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 結(jié)核分枝桿菌 硝基還原酶 結(jié)合實驗 位點突變 酶活實驗

【摘要】：結(jié)核分枝桿菌是人類重要的致病細菌,可導(dǎo)致結(jié)核病。Rv3368c是結(jié)核分枝桿菌H37Rv中的一種硝基還原酶。Rv3368c硝基還原酶是一類以FMN為輔基而且依賴NADPH的黃素蛋白,能夠?qū)⒑邢趸鶊F的底物進行還原,在生物修復(fù)和前藥激活方面具有良好的應(yīng)用前景。我們利用NCBI提供的Rv3368c基因序列設(shè)計引物,將大腸桿菌進行PCR擴增獲得目的基因后,將其克隆到PSUMHO載體上,轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)大腸桿菌中,經(jīng)過對表達純化條件優(yōu)化,獲得重組蛋白。我們利用硒代甲硫氨酸的方法首次獲得Rv3368c蛋白的結(jié)構(gòu),并通過ITC結(jié)合實驗驗證Rv3368c和小分子FMN有較強的結(jié)合,通過浸泡實驗得到了 Rv3368c-FMN的復(fù)合物結(jié)構(gòu)。進而與FMN結(jié)合相關(guān)殘基的突變進行分析,確定了 18Arg、157Trp、202Arg殘基對FMN結(jié)合的重要性。BTZ043是一種新型的的治療結(jié)核病的藥物,通過酶活實驗驗證Rv3368c可以對底物BTZ043進行作用催化。雖然Rv3368c的生物學(xué)功能和催化機制還需要進一步探索,但ITC結(jié)合實驗和酶活實驗在幫助我們理解Rv3368c的工作機制中是非常有意義的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R378.911

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本文編號：1355284