本文關(guān)鍵詞：miR-493通過靶向作用于MIF調(diào)控大鼠腦缺血模型的血管新生　出處：《華中科技大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的：探討miR-493對(duì)腦梗塞后血管新生的影響及其機(jī)制。方法：建立大鼠大腦中動(dòng)脈梗塞(MCAO)模型,分別于梗塞后3天和7天應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)梗塞周邊miR-493的表達(dá)；側(cè)腦室注射agomir-493上調(diào)miR-493的表達(dá),應(yīng)用FITC灌注檢測(cè)梗塞周邊血管灌注；原代培養(yǎng)大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(RBMECs),建立糖氧剝奪(OGD)模型模擬缺血狀態(tài),利用PCR檢測(cè)miR-493的表達(dá)；miR-493 mimic和miR-493 inhibitor轉(zhuǎn)染RBMECs以上下調(diào)細(xì)胞中miR-493的表達(dá),利用基質(zhì)膠實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-493對(duì)RBMECs管腔形成的影響,transwell實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-493對(duì)RBMECs遷移能力的影響,CCK8檢測(cè)miR-493對(duì)RBMECs增殖能力的影響。分別利用PCR、western-blot檢測(cè)大鼠MCAO模型梗塞周邊區(qū)巨噬細(xì)胞游走抑制因子(MIF)mRNA和蛋白水平的表達(dá)；利用PCR、western-blot、 ELISA檢測(cè)OGD6小時(shí)的RBMECs中MIFmRNA及蛋白水平的表達(dá)。應(yīng)用miR-493mmimic和miR-493 inhibitor上下調(diào)miR-493后,PCR、Western-blot和ELISA檢測(cè)RBMECs中MIF mRNA及蛋白水平的表達(dá)。雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MIF是否為miR-493的直接靶點(diǎn)。在RBMECs中,利用siRNA技術(shù)干擾miR-493與MIF結(jié)合,再外源性給予重組MIF并轉(zhuǎn)染miR-493 inhibitor,觀察miR-493對(duì)RBMECs管腔形成、遷移及增殖的影響是否依賴MIF。分別應(yīng)用miR-493mimic和miR-493 inhibitor上下調(diào)miR-493的表達(dá),western-blot檢測(cè)AKT、p-AKT、ERK、p-ERK的表達(dá)。建立大鼠MCAO模型后,側(cè)腦室注射antagomir-493下調(diào)miR-493的表達(dá),應(yīng)用TTC檢測(cè)梗塞面積,改良神經(jīng)功能評(píng)分評(píng)估神經(jīng)功能,FITC檢測(cè)梗塞周邊血管灌注情況。結(jié)果：1)大鼠MCAO后第3天及第7天miR-493的表達(dá)下降,OGD6小時(shí)后RBMECs中miR-493表達(dá)亦下降。2)建立MCAO模型后,側(cè)腦室注射agomir-493,大鼠梗塞周邊血管灌注減少。3)轉(zhuǎn)染miR-493 mimic后,RBMECs的管腔形成、增殖及遷移均減少,而轉(zhuǎn)染miR-493 inhibitor則相反。4)通過篩查數(shù)據(jù)庫找到miR-493可能的作用靶點(diǎn)MIF,證實(shí)缺血缺氧后MIF表達(dá)上調(diào),并受miR-493負(fù)向調(diào)控,雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)MIF為miR-493的直接作用靶點(diǎn)。5)通過siRNA干擾miR-493與MIF作用位點(diǎn),轉(zhuǎn)染miR-493 inhibitor后,RBMECs的管腔形成、細(xì)胞增殖及遷移能力受到抑制,而給予外源性MIF后可使其部分恢復(fù),進(jìn)一步證實(shí)miR-493對(duì)血管新生的影響依賴于MIF。 6)p-AKT、p-ERK表達(dá)受miR-493負(fù)向調(diào)控,并受MIF調(diào)控,證實(shí)MIF下游為AKT、ERK通路。7)大鼠MCAO后側(cè)腦室注射antagomir-493下調(diào)miR-493的表達(dá),發(fā)現(xiàn)梗塞面積減小,神經(jīng)功能評(píng)分增高,梗塞周邊血流灌注增多。結(jié)論：腦梗塞后miR-493表達(dá)下降。miR-493可調(diào)控腦梗塞后血管新生,其作用依賴于其直接作用靶點(diǎn)MIF。MIFF游為AKT、ERK通路。腦梗塞后可通過下調(diào)miR-493促進(jìn)梗塞周邊血管新生,提高神經(jīng)功能修復(fù)。miR-493可作為腦梗塞后治療的新靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R743.3;R-332

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