發(fā)布時間：2017-12-29 04:05

  本文關(guān)鍵詞：miR-493通過靶向作用于MIF調(diào)控大鼠腦缺血模型的血管新生　出處：《華中科技大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 腦缺血 血管新生 miR-493 MIF AKT ERK

【摘要】：目的：探討miR-493對腦梗塞后血管新生的影響及其機制。方法：建立大鼠大腦中動脈梗塞(MCAO)模型,分別于梗塞后3天和7天應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測梗塞周邊miR-493的表達；側(cè)腦室注射agomir-493上調(diào)miR-493的表達,應(yīng)用FITC灌注檢測梗塞周邊血管灌注；原代培養(yǎng)大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞(RBMECs),建立糖氧剝奪(OGD)模型模擬缺血狀態(tài),利用PCR檢測miR-493的表達；miR-493 mimic和miR-493 inhibitor轉(zhuǎn)染RBMECs以上下調(diào)細胞中miR-493的表達,利用基質(zhì)膠實驗檢測miR-493對RBMECs管腔形成的影響,transwell實驗和細胞劃痕實驗檢測miR-493對RBMECs遷移能力的影響,CCK8檢測miR-493對RBMECs增殖能力的影響。分別利用PCR、western-blot檢測大鼠MCAO模型梗塞周邊區(qū)巨噬細胞游走抑制因子(MIF)mRNA和蛋白水平的表達；利用PCR、western-blot、 ELISA檢測OGD6小時的RBMECs中MIFmRNA及蛋白水平的表達。應(yīng)用miR-493mmimic和miR-493 inhibitor上下調(diào)miR-493后,PCR、Western-blot和ELISA檢測RBMECs中MIF mRNA及蛋白水平的表達。雙熒光素酶實驗檢測MIF是否為miR-493的直接靶點。在RBMECs中,利用siRNA技術(shù)干擾miR-493與MIF結(jié)合,再外源性給予重組MIF并轉(zhuǎn)染miR-493 inhibitor,觀察miR-493對RBMECs管腔形成、遷移及增殖的影響是否依賴MIF。分別應(yīng)用miR-493mimic和miR-493 inhibitor上下調(diào)miR-493的表達,western-blot檢測AKT、p-AKT、ERK、p-ERK的表達。建立大鼠MCAO模型后,側(cè)腦室注射antagomir-493下調(diào)miR-493的表達,應(yīng)用TTC檢測梗塞面積,改良神經(jīng)功能評分評估神經(jīng)功能,FITC檢測梗塞周邊血管灌注情況。結(jié)果：1)大鼠MCAO后第3天及第7天miR-493的表達下降,OGD6小時后RBMECs中miR-493表達亦下降。2)建立MCAO模型后,側(cè)腦室注射agomir-493,大鼠梗塞周邊血管灌注減少。3)轉(zhuǎn)染miR-493 mimic后,RBMECs的管腔形成、增殖及遷移均減少,而轉(zhuǎn)染miR-493 inhibitor則相反。4)通過篩查數(shù)據(jù)庫找到miR-493可能的作用靶點MIF,證實缺血缺氧后MIF表達上調(diào),并受miR-493負向調(diào)控,雙熒光素酶實驗進一步證實MIF為miR-493的直接作用靶點。5)通過siRNA干擾miR-493與MIF作用位點,轉(zhuǎn)染miR-493 inhibitor后,RBMECs的管腔形成、細胞增殖及遷移能力受到抑制,而給予外源性MIF后可使其部分恢復(fù),進一步證實miR-493對血管新生的影響依賴于MIF。 6)p-AKT、p-ERK表達受miR-493負向調(diào)控,并受MIF調(diào)控,證實MIF下游為AKT、ERK通路。7)大鼠MCAO后側(cè)腦室注射antagomir-493下調(diào)miR-493的表達,發(fā)現(xiàn)梗塞面積減小,神經(jīng)功能評分增高,梗塞周邊血流灌注增多。結(jié)論：腦梗塞后miR-493表達下降。miR-493可調(diào)控腦梗塞后血管新生,其作用依賴于其直接作用靶點MIF。MIFF游為AKT、ERK通路。腦梗塞后可通過下調(diào)miR-493促進梗塞周邊血管新生,提高神經(jīng)功能修復(fù)。miR-493可作為腦梗塞后治療的新靶點。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R743.3;R-332

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳同度,張昌穎;素食大鼠的貧血現(xiàn)象[J];營養(yǎng)學(xué)報;1957年04期

2 陳偉強;趙善廣;;自制注射用大鼠固定裝置[J];上海實驗動物科學(xué);1992年04期

3 肖柳英,林培英,馮昭明,張丹;不同周齡的SD大鼠生理、生化及體重的正常值測定[J];中藥新藥與臨床藥理;1996年03期

4 李淑云;簡易大鼠灌胃器的制作[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2001年04期

5 楊明智,陳積圣;一種大鼠抓取與固定的新工具介紹[J];上海實驗動物科學(xué);2001年03期

6 戴英,陸群;復(fù)方H_(505)對Wistar大鼠外周血的血液流變學(xué)指標(biāo)的影響[J];中國血液流變學(xué)雜志;2001年01期

7 韋應(yīng)波,孫喜慶,曹新生,姚永杰,馮岱雅,楊長斌;+Gz暴露時間對大鼠記憶功能和行為的影響[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2003年01期

8 呂學(xué)軍,郭俊生,李敏,周利梅,張永娟;暈船大鼠體內(nèi)鐵含量的變化[J];中國職業(yè)醫(yī)學(xué);2003年04期

9 湯仁仙,王迎偉,王慧,周峰;201A中藥合劑對大鼠抗腎小球基底膜腎炎病變的影響[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2003年06期

10 孫同柱,付小兵,翁立新,梁雪梅,陳偉;介紹一種簡易的大鼠保定方法[J];上海實驗動物科學(xué);2004年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 尹音;孫振宇;胡敏;李冬霞;;持續(xù)性高正加速度對大鼠顳頜關(guān)節(jié)損傷的作用[A];第八屆全國顳下頜關(guān)節(jié)病學(xué)及（牙合）學(xué)大會論文匯編[C];2011年

2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文編號：1348704