本文關(guān)鍵詞：基于慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激大鼠模型的“肝主疏泄”生物學(xué)基礎(chǔ)研究　出處：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2016年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的從解剖肝與功能肝兩個(gè)角度,在器官、蛋白、基因三個(gè)層面,對(duì)“肝主疏泄”的生物學(xué)基礎(chǔ)進(jìn)行初步探索。方法實(shí)驗(yàn)研究分三部分：(一)對(duì)慢性應(yīng)激進(jìn)行8周的動(dòng)態(tài)觀察。采用體重、糖水偏好實(shí)驗(yàn)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、小動(dòng)物肝臟超聲、腦靜息態(tài)BOLD方法(Reho和ALFF),對(duì)慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激大鼠模型的抑郁狀態(tài)、肝臟解剖形態(tài)及血流動(dòng)力學(xué)、全腦神經(jīng)元異�；顒�(dòng)腦區(qū)進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測(cè)分析,從動(dòng)態(tài)角度觀察“肝失疏泄”過(guò)程解剖學(xué)肝臟及中樞腦區(qū)的變化,闡釋“肝主疏泄”的生物學(xué)內(nèi)涵。(二)在實(shí)驗(yàn)一的基礎(chǔ)上,篩選慢性應(yīng)激抑郁癥肝郁脾虛證大鼠模型,采用肝臟超聲、腦靜息態(tài)BOLD(Reho和ALFF)、酶聯(lián)免疫法、高效液柑、數(shù)字化基因表達(dá)譜、PCR等方法,根據(jù)973課題假說(shuō),進(jìn)行相關(guān)肝血流動(dòng)力學(xué)、神經(jīng)元活動(dòng)異常腦區(qū)、血液相關(guān)理化指標(biāo)(Hcy、Ang-Ⅱ、5-HT、NE、DA、Cort),下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)(NE、DOPAC、DA、5-HIAA、5-HT、HVA)、肝、海馬差異基因的檢測(cè)及分析,從“疏泄不及”的病理模型角度闡釋“肝主疏泄”的生物學(xué)內(nèi)涵。(三)觀察四逆散對(duì)抑郁癥肝郁脾虛證模型的抗抑郁分子機(jī)制,采用與實(shí)驗(yàn)二相同的方法對(duì)相關(guān)血液理化指標(biāo)(Hcy、Ang-Ⅱ、5-HT、NE、DA、Cort)、下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)(NE、DOPAC、DA、 5-HIAA、5-HT、HVA)、部分肝臟差異基因(Cyp1a1、Cyp1a2、Cyp7b1、Hnf4a、和Hnf4γ)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè),并對(duì)分子生物學(xué)結(jié)果與行為學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行相關(guān)分析,從疏肝效應(yīng)角度,對(duì)“肝主疏泄”的分子生物學(xué)基礎(chǔ)進(jìn)行闡釋。結(jié)果(一)從慢性應(yīng)激第2周起,CUMS組大鼠的體重、糖水偏好度以及自主活動(dòng)度均顯著低于正常組，，應(yīng)激8周時(shí),CUMS組大鼠肝靜脈管徑顯著高于正常組,在應(yīng)激2周、4周、6周時(shí),肝靜脈血流流速顯著低于正常組,肝靜脈血流流量在第6周顯著低于正常組。門(mén)靜脈血流流速在應(yīng)激4、8周時(shí)顯著低于正常組,門(mén)靜脈血流流量在應(yīng)激第8周時(shí)顯著低于正常組；應(yīng)激第2周時(shí),模型組與正常組相比小腦后葉Reho增強(qiáng),應(yīng)激4周時(shí),海馬、嗅皮層、感覺(jué)皮層、紋狀體Reho增強(qiáng),應(yīng)激6周時(shí),海馬、背側(cè)丘腦外側(cè)核群Reho減弱,應(yīng)激8周時(shí),海馬、下丘腦乳頭區(qū)、中腦被蓋部、嗅皮層、梨狀皮層、腦橋基底部Reho均減弱。在應(yīng)激第2周時(shí),模型組與正常組相比主要表現(xiàn)為嗅球ALFF增強(qiáng),島葉皮層、嗅皮層、感覺(jué)皮層減弱,應(yīng)激4周時(shí)，呈現(xiàn)海馬、視覺(jué)皮層ALFF增強(qiáng)狀態(tài)；應(yīng)激6周時(shí),運(yùn)動(dòng)皮層、感覺(jué)皮層ALFF增強(qiáng),背側(cè)丘腦外側(cè)核群、延髓、中腦被蓋部、腦橋基底部、腦橋被蓋部ALFF減弱,應(yīng)激8周時(shí),小腦核、下丘腦視前區(qū)、腦橋基底部ALFF減弱。(二)抑郁癥肝郁脾虛組大鼠的體重與糖水偏好度、穿格總距離與直立次數(shù)較正常組均明顯降低；門(mén)靜脈血流流速、流量均較正常組顯著降低；靜息態(tài)BOLD結(jié)果同實(shí)驗(yàn)一第8周結(jié)果；抑郁癥肝郁脾虛證大鼠下丘腦5-HT、5-HIAA、DA含量較正常組顯著降低；抑郁癥肝郁脾虛大鼠血液Hcy含量顯著高于正常組,Cor含量顯著增加,NE含量顯著降低；與正常組相比,肝郁脾虛組模型大鼠肝臟共有46個(gè)差異表達(dá)基因,海馬共有85個(gè)差異表達(dá)基因,兩者KEGG富集通路中最顯著的6條通路中均涉及到細(xì)胞色素P450家族基因,分別采用PCR對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果呈一致性。(三)四逆散可顯著改善抑郁癥肝郁脾虛模型大鼠的直立次數(shù),在穿格總距離、糖水偏好度及游泳不動(dòng)時(shí)間僅表現(xiàn)改善趨勢(shì)；血液理化指標(biāo)中四逆散與模型組相比,Ang-Ⅱ顯著降低,其它無(wú)明顯差異；四逆散組可顯著改善下丘腦5-HT水平,對(duì)下丘腦5-HIAA、DA水平有改善趨勢(shì)；直立次數(shù)與下丘腦5-HIAA、5-HT、DA、肝臟Hnf4y基因表達(dá)量呈顯著正相關(guān),穿格總距離、游泳不動(dòng)時(shí)間分別與5-HIAA呈顯著正相關(guān)與負(fù)相關(guān)。結(jié)論(一)器官層面：動(dòng)態(tài)觀察及病理模型兩個(gè)角度證明肝疏泄功能涉及肝血流動(dòng)力學(xué)尤其是肝臟門(mén)靜脈血流動(dòng)力學(xué)的改變,腦邊緣系統(tǒng)尤其是海馬、下丘腦等以及一些非邊緣腦區(qū)包括小腦、中腦、感覺(jué)皮層、視皮層、運(yùn)動(dòng)皮層等均存在神經(jīng)元活異常改變；蛋白層面：病理模型及疏肝方劑反證兩個(gè)角度共同證明血液Cort、下丘腦5-HT及DA是“肝主疏泄”生物學(xué)基礎(chǔ)之一；基因?qū)用妫骸案问栊埂睍r(shí)解剖學(xué)肝臟、功能學(xué)肝臟(海馬)均存在CYP450家族的代謝功能障礙。(二)四逆散可通過(guò)調(diào)節(jié)下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)及肝臟Hnf4α、Hnf4γ基因水平發(fā)揮抗抑郁效應(yīng),為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中抑郁癥的發(fā)病機(jī)制與肝臟之間的聯(lián)系做出一些提示。(三)動(dòng)態(tài)觀察、抑郁癥肝郁脾虛證模型以及疏肝方劑療效三個(gè)角度共同證明解剖學(xué)肝臟與功能性肝臟均為中醫(yī)肝藏象理論的組成部分。
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【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R223;R-332


本文編號(hào)：1347968