本文關鍵詞：PDGF-GAL真核表達載體的構建及細胞表達

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【摘要】：旨在構建真核表達載體pcDNA-PDGF-GAL,觀察重組質粒轉染N-2a細胞后甘丙肽基因(galanin,GAL)的表達水平。采用PCR方法,以重組質粒pUC18-PDGF-GAL為模板,擴增PDGF-GAL基因序列,最終定向克隆入載體pcDNA3.1并替換該載體的CMV啟動子與增強子序列,從而構建具有神經細胞特異性的表達載體pcDNA-PDGF-GAL。然后利用脂質體法將重組質粒瞬時轉染小鼠N-2a細胞,分別在轉染后24、48和72 h收集細胞及細胞培養(yǎng)物,采用RT-PCR和ELISA方法,鑒定GAL基因在神經細胞中的過表達。結果顯示,經PCR和DNA序列測定證實,目的基因已插入表達載體,RT-PCR和ELISA證明,脂質體法瞬時轉染N-2a細胞實現GAL基因的過表達。成功構建pcDNA3.1-PDGF-GAL,實現GAL基因在N-2a細胞過表達,從而為制作過表達GAL的穩(wěn)轉細胞及進一步研究GAL在神經系統的生物學功能奠定基礎。
【作者單位】： 山西醫(yī)科大學實驗動物中心;
【分類號】：R346
【正文快照】： 甘丙肽是一種廣泛分布外周和中樞神經系統的神經肽,研究發(fā)現,它具有調節(jié)胰腺分泌,促進食欲,抑制脂肪組織中抵抗素基因的表達,影響胃腸蠕動,提高垂體生長激素,催乳素,促黃體生成激素釋放等功能,尤其在學習,記憶,痛覺和脊神經反射等神經功能方面發(fā)揮重要作用。國外不僅利用外源

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本文編號：1285868