本文關(guān)鍵詞：利用亞細(xì)胞組分蛋白分離技術(shù)有效提取細(xì)胞骨架及其相關(guān)蛋白

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【摘要】：目的建立一種可用于后續(xù)雙向電泳研究的細(xì)胞骨架及相關(guān)蛋白的提取方法。方法采用亞細(xì)胞組分蛋白分步提取方法,根據(jù)提取過程中細(xì)胞形態(tài)變化,提取后組分蛋白電泳圖譜等優(yōu)化提取條件。用雙向凝膠電泳、免疫印跡分析、蛋白質(zhì)點(diǎn)質(zhì)譜鑒定等方法驗(yàn)證該提取方法的重復(fù)性和各組分蛋白提取純度。結(jié)果各組分蛋白的雙向電泳蛋白圖譜差異明顯,具備各自特征性的蛋白點(diǎn)分布,各組分標(biāo)志蛋白FAK、Integrin-β1、Histone H1和cytokeratin 19分別只表達(dá)在細(xì)胞漿、細(xì)胞膜、細(xì)胞核和細(xì)胞骨架組分。細(xì)胞骨架蛋白組分中約90%以上的蛋白質(zhì)點(diǎn)經(jīng)質(zhì)譜鑒定為細(xì)胞骨架及相關(guān)蛋白。結(jié)論亞細(xì)胞組分蛋白順序提取方法具有較好的重復(fù)性,提取組分選擇性較高,并且能夠有效提高低豐度蛋白的檢出效率,是一種比較理想的進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究的樣本預(yù)處理方法。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院檢驗(yàn)科;香港大學(xué)李嘉誠(chéng)醫(yī)學(xué)院解剖系;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81101609) 廣東省自然科學(xué)基金(9451051501003304)~~
【分類號(hào)】：R341
【正文快照】： 人類蛋白質(zhì)組的概念最初由wilkins在上世紀(jì)90年代提出，是指生物體整個(gè)生命過程中基因組所表達(dá)及表達(dá)后修飾的全部蛋白質(zhì){’〕，蛋自質(zhì)組學(xué)則是研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)表達(dá)模式包括表達(dá)數(shù)量、種類、豐度等和功能模式包括蛋白質(zhì)的功能及蛋白質(zhì)間的相互作用的學(xué)科。據(jù)估計(jì)人體中蛋白

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