本文關(guān)鍵詞：抗SEB單克隆抗體可變區(qū)基因克隆及單鏈抗體的基因構(gòu)建和表達(dá)

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【摘要】：目的從分泌抗SEB的單克隆抗體(FMU-SEB-No.1)雜交瘤細(xì)胞中,克隆出FMU-SEB-No.1重鏈和輕鏈可變區(qū)(VH和VL)基因,構(gòu)建FMU-SEB-No.1單鏈抗體(scFv)的原核表達(dá)載體,并進(jìn)行scFv基因的蛋白表達(dá)。方法從FMU-SEB-No.1雜交瘤細(xì)胞中提取總RNA,采用RT-PCR擴(kuò)增出VH和VL基因;通過在引物上設(shè)計(jì)linker序列,拼接VH和VL為完整FMU-SEB-No.1的scFv基因(FMU-SEB-scFv)。將測(cè)序正確的scFv基因克隆入PGEX4T-1載體,轉(zhuǎn)化入E.coli BL21(DE3)進(jìn)行蛋白表達(dá)。通過SDS-PAGE,Western blot法分析其表達(dá)水平和特異性,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)鑒定其抗原結(jié)合活性。結(jié)果測(cè)序結(jié)果顯示,本實(shí)驗(yàn)成功克隆出FMU-SEB-No.1重鏈及輕鏈可變區(qū)基因,并成功構(gòu)建FMU-SEB-scFv基因,所得的基因全長(zhǎng)為750 bp,編碼250個(gè)氨基酸。SDS-PAGE和Western blot分析表明,PGEX4T1-FMU-SEB-scFv在E.coli BL21(DE3)可表達(dá)為Mr約54 000的可溶型scFv/GST融合蛋白。間接ELISA檢測(cè)結(jié)果表明,可溶型scFv/GST融合蛋白與SEB具有較高的抗原結(jié)合活性。結(jié)論制備并鑒定了針對(duì)SEB的基因工程抗體,為開發(fā)出針對(duì)SEB的治療性抗體奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系;
【基金】：重大新藥創(chuàng)制科技重大專項(xiàng)(2008ZXJ09003-009,2012ZX09J12106-02B)
【分類號(hào)】：R392.1
【正文快照】： 葡萄球菌腸毒素(staphylococcal enterotoxins,SE)是金黃色葡萄球菌(S.aureus,SA)分泌的一種具有超抗原活性的細(xì)菌外毒素[1]。葡萄球菌超抗原毒素在刺激機(jī)體免疫反應(yīng)時(shí),不需要抗原呈遞細(xì)胞的攝取并加工成抗原多肽后再呈遞給T淋巴細(xì)胞,而是直接與抗原提呈細(xì)胞上的MHCⅡ分子和T

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本文編號(hào)：1264176