本文關(guān)鍵詞：豬帶絳蟲TSO45W-4B基因的克隆、表達(dá)和抗體制備

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【摘要】：目的克隆、表達(dá)豬帶絳蟲TSO45W-4B基因,以重組蛋白TSO45W-4B免疫兔制備抗體。方法全基因合成豬帶絳蟲TSO45W-4B抗原編碼基因,定向克隆至pGEX-1λT表達(dá)載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEX-TSO45W-4B。轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌ArcticExpress(DE3)后,異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá),十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析表達(dá)情況。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)親和層析柱純化后,免疫新西蘭大白兔,制備抗血清。GST親和層析柱純化獲得血清中抗體后,ELISA測定抗體效價,蛋白質(zhì)印跡法(Western blotting)鑒定抗體特異性。結(jié)果酶切和測序結(jié)果表明,重組質(zhì)粒pGEX-TSO45W-4B構(gòu)建成功。SDS-PAGE結(jié)果顯示,重組蛋白相對分子質(zhì)量(M r)約為40 000,經(jīng)GST親和層析后可獲得純度為90%以上的重組蛋白。ELISA結(jié)果顯示,抗體的效價為1∶512 000。Western blotting分析結(jié)果顯示,該抗體能與純化的重組蛋白發(fā)生特異性反應(yīng),在約M r40 000處出現(xiàn)一條帶,與預(yù)期大小一致。結(jié)論豬帶絳蟲TSO45W-4B基因能在大腸埃希菌中表達(dá),制備了TSO45W-4B重組蛋白和兔抗血清。
【作者單位】： 遵義醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室;遵義醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院中醫(yī)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81160206) 貴州省教育廳資助項目(黔教2010040號)~~
【分類號】：R383.3
【正文快照】： 豬囊尾蚴病(cysticercosis cellulosae)又稱囊蟲病(cysticercosis),是由豬帶絳蟲(Taenia solium)的中絳期幼蟲寄生在人體皮下、肌肉、腦和眼等器官引起的一種嚴(yán)重危害人類健康的人獸共患寄生蟲病,已成為全球性的公共衛(wèi)生問題。中國是囊尾蚴病高發(fā)國家之一,其中以東北、華北、

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：1255504