本文關(guān)鍵詞：攜帶TGF-βⅡ型受體及NKG2D融合基因的NK-92細(xì)胞生物學(xué)特性研究

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【摘要】：目的構(gòu)建攜帶TGF-βreceptorⅡ(TGF-βRⅡ)胞外段跨膜區(qū)及NKG2D胞內(nèi)段融合基因的NK-92細(xì)胞,并檢測(cè)其生物學(xué)特性。方法通過(guò)RT-PCR從人外周血淋巴細(xì)胞中擴(kuò)增出TGF-βreceptorⅡ胞外段跨膜區(qū)及NKG2D胞內(nèi)段基因;利用PCR的方法將2段基因融合,并構(gòu)建含有融合基因的慢病毒穿梭質(zhì)粒;將該質(zhì)粒與包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,獲得慢病毒顆粒并感染NK-92細(xì)胞系,篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的NK-92細(xì)胞系;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)目的基因在轉(zhuǎn)染后的NK-92細(xì)胞系中的表達(dá),用CCK-8的方法檢測(cè)24 h和48 h時(shí)NK-92-TN的存活能力,同時(shí)用Transwell的方法檢測(cè)NK-92-TN的遷移能力。結(jié)果測(cè)序表明,成功獲得了TGF-βRⅡ胞外段跨膜區(qū)與NKG2D胞內(nèi)段的融合基因;獲得了重組慢病毒;通過(guò)篩選得到了可穩(wěn)定表達(dá)融合基因的NK-92細(xì)胞系,同時(shí)NK-92-TN的存活能力和遷移能力要明顯優(yōu)于對(duì)照組。結(jié)論成功建立表達(dá)TN的NK-92細(xì)胞系,并且發(fā)現(xiàn)NK-92-TN的存活能力和遷移能力明顯優(yōu)于對(duì)照組,從而為NK-92-TN細(xì)胞的體內(nèi)生物學(xué)功能的研究工作奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 蘇州大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院腫瘤與細(xì)胞分子免疫實(shí)驗(yàn)室;
【分類號(hào)】：R392.1
【正文快照】： 上世紀(jì)80年代相繼發(fā)現(xiàn)了TGF-β1、TGF-β2及TGF-β3[1],到目前為止,該家族成員又增加了TGF-β4、TGF-β5。該家族成員的受體主要有TGF-βreceptorⅠ,TGF-βreceptorⅡ和TGF-βreceptorⅢ3種類型。在炎癥及腫瘤發(fā)生的早期TGF-β主要抑制炎癥及腫瘤的發(fā)展,但是在腫瘤發(fā)生的晚期

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2 楊s，

本文編號(hào)：1240817