本文關(guān)鍵詞：穩(wěn)定過(guò)表達(dá)人SIRT1基因的HEK293細(xì)胞系的建立

  更多相關(guān)文章： 心血管疾病 SIRT 穩(wěn)定過(guò)表達(dá) HEK細(xì)胞

【摘要】：目的:構(gòu)建人沉默信息調(diào)節(jié)因子2同源蛋白1(SIRT1)基因的真核表達(dá)載體,建立穩(wěn)定過(guò)表達(dá)人SIRT1的HEK293細(xì)胞系。方法:將含有SIRT1的克隆載體pCR Ⅱ-TOPO-SIRT1雙酶切后,連接至真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)中,連接產(chǎn)物經(jīng)酶切鑒定后進(jìn)行測(cè)序。構(gòu)建的重組真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-SIRT1轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,G418進(jìn)行篩選,Real-time PCR和Western Blot分別從mRNA和蛋白水平檢測(cè)SIRT1的表達(dá)。結(jié)果:酶切分析和測(cè)序結(jié)果證實(shí),SIRT1基因成功插入真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)中。Real-time PCR和Western Blot結(jié)果顯示穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pc DNA3.1(+)-SIRT1的HEK293細(xì)胞SIRT1的表達(dá)水平明顯高于未轉(zhuǎn)染細(xì)胞(P㩳0.01)。結(jié)論:成功構(gòu)建了真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)-SIRT1,并建立了穩(wěn)定過(guò)表達(dá)SIRT1基因的HEK293細(xì)胞系,為進(jìn)一步研究SIRT1基因在心血管疾病中的作用及其機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理系;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):81072643)
【分類號(hào)】：R363
【正文快照】： 沉默信息調(diào)節(jié)因子2同源蛋白1(silent matingtype information regulation2homologue1,SIRT1)是一種NAD+依賴的組蛋白/非組蛋白去乙�；竅1]。SIRT1在不同的組織中廣泛表達(dá),介導(dǎo)的細(xì)胞生理功能包括轉(zhuǎn)錄沉默、能量代謝和衰老等[2-4]。研究已證實(shí)SIRT1在動(dòng)脈粥樣硬化、心肌炎損

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 徐春華;劉遠(yuǎn)厚;;鈣激活鉀通道α單位的研究現(xiàn)況[J];醫(yī)學(xué)綜述;2006年23期

2 王瑋;高衛(wèi)真;;線粒體與心肌細(xì)胞凋亡[J];醫(yī)學(xué)綜述;2007年20期

3 劉梅顏;胡大一;;關(guān)注心血管疾病患者的精神心理問(wèn)題[J];中華全科醫(yī)師雜志;2007年10期

4 陳小弟;;心血管內(nèi)科病人心理問(wèn)題及對(duì)策分析[J];臨床醫(yī)藥實(shí)踐;2009年35期

5 余漢杰;;羅馬臨床醫(yī)學(xué)中的生物技術(shù)國(guó)際討論會(huì)簡(jiǎn)介[J];瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1987年04期

6 錢永如;沈錦;;氧自由基與小兒心血管疾病[J];國(guó)際兒科學(xué)雜志;1990年06期

7 尹瑞興;夏樹(shù)楹;;內(nèi)皮素與心血管疾病[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1992年04期

8 朱小君，姚阿卿，劉勃，俞煒源，溫進(jìn)坤，李岱宗，周愛(ài)儒，湯健;外源基因在大鼠體內(nèi)不同組織的表達(dá)[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;1994年03期

9 吳祥聲;降鈣素基因相關(guān)肽[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè);1994年05期

10 陳華東，丁克祥;硒自由基與老年心血管疾病[J];微量元素與健康研究;1996年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 郭永平;張敏芳;袁江姿;戴慧莉;錢家麒;;人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)[A];2007年浙滬兩地腎臟病學(xué)術(shù)年會(huì)資料匯編[C];2007年

2 王應(yīng);張穎妹;韓文玲;馬大龍;;人CKLF1是人CC趨化因子受體4的功能配體[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

3 朱毅;;流體剪切力在血管內(nèi)皮細(xì)胞中調(diào)節(jié)AMPK和SIRT1的機(jī)制研究[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)心血管生理學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

4 鄭嬋穎;楊巍;楊秀娟;邱爽;劉純青;段樹(shù)民;羅建紅;;NMDA受體的表面表達(dá)需要NR2亞單位第四跨膜區(qū)后的一段短肽[A];中國(guó)神經(jīng)科學(xué)學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)會(huì)議暨學(xué)會(huì)成立十周年慶祝大會(huì)論文摘要匯編[C];2005年

5 李輝;徐貴發(fā);Patrick Tso;;載脂蛋白A-IV的研究進(jìn)展[A];山東營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)營(yíng)養(yǎng)與疾病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2006年

6 陳紹建;;中國(guó)被試的A型行為(TABP)特征研究[A];全國(guó)第七屆心理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議文摘選集[C];1993年

7 張文娟;莊志雄;;SIRT1與衰老相關(guān)研究進(jìn)展[A];第五屆廣東省環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)暨第三屆廣東省預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)衛(wèi)生毒理專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2006年

8 彭佩芬;蔡德根;;硒與臨床[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第21屆全國(guó)代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2002年

9 李麗梅;;軀體疾病中的抑郁和焦慮[A];中國(guó)心理衛(wèi)生協(xié)會(huì)殘疾人心理衛(wèi)生分會(huì)第四屆學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2002年

10 姜輝;田亞平;宋淑珍;;疾病防治與抗氧化劑應(yīng)用[A];第六屆全國(guó)自由基生物學(xué)與自由基醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議和海峽兩岸自由基生物學(xué)與自由基醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2004年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 記者 崔立新;近九成住院冠心病患者有焦慮或抑郁情緒[N];中國(guó)人口報(bào);2008年

2 高原;壓力過(guò)大會(huì)顯著增加患心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2008年

3 胡永東邋冀成君;從侯耀文病逝看心理病因[N];健康報(bào);2007年

4 ;“炮轟”過(guò)度診療 倡導(dǎo)“雙心”健康[N];科學(xué)導(dǎo)報(bào);2006年

5 崔翔宇;Ghrelin：其結(jié)構(gòu)及生理學(xué)的重要性 Discovery of Ghrelin：Its Structure and Physiological Significance[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

6 記者 楊麗;北科搶占干細(xì)胞產(chǎn)業(yè)先機(jī)[N];泰州日?qǐng)?bào);2011年

7 本報(bào)特約撰稿人 劉元江;干細(xì)胞研究 有望沖破倫理樊籬[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

8 孟慶普;專家研討“人體結(jié)垢”新觀點(diǎn)[N];健康報(bào);2007年

9 劉文山;反式脂肪酸[N];家庭醫(yī)生報(bào);2007年

10 余志平;靶向蛋白酶：成功、失敗與前景(一)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李莉;SIRT1在血管平滑肌細(xì)胞增殖和新生內(nèi)膜形成中的作用及分子機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

2 陳金中;人類RBBP10和bima3的克隆和功能研究[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

3 耿義群;限制飲食對(duì)老年早期大鼠行為學(xué)和海馬組織學(xué)及SirT1和FoxO3a信號(hào)途徑的影響[D];汕頭大學(xué);2007年

4 王淑霞;大鼠血管的增齡變化及其可能機(jī)制[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1997年

5 王華;血管緊張素II對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞整合素β3表達(dá)及轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1999年

6 王英;人胚胎生殖細(xì)胞體外培養(yǎng)體系的建立及其向心肌前體細(xì)胞分化的初步研究[D];吉林大學(xué);2007年

7 張敬各;同型半胱氨酸經(jīng)DDAH/ADMA/NOS/NO通路損害血管內(nèi)皮細(xì)胞的NO系統(tǒng)[D];四川大學(xué);2007年

8 李秋霞;有氧運(yùn)動(dòng)通過(guò)eNOS增強(qiáng)的線粒體功能改善老年大鼠心肌胰島素抵抗[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2007年

9 高宇;血漿尾加壓素Ⅱ水平在相關(guān)疾病中變化的臨床和基礎(chǔ)研究[D];吉林大學(xué);2009年

10 郭志堅(jiān);晚期糖基化終產(chǎn)物修飾的蛋白質(zhì)對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞的病理生物學(xué)作用及其機(jī)制的研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2002年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 趙潔明;鎘誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡與Bcl-2抗凋亡機(jī)理研究[D];南京師范大學(xué);2006年

2 趙宇豪;1、SIRT1在CIITA介導(dǎo)MHC Ⅱ轉(zhuǎn)錄激活中的作用 2、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶SUV39H2在心梗中的作用機(jī)制初探[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

3 古麗扎爾·買買提明;心理干預(yù)對(duì)老年冠心病介入治療患者情緒障礙的影響[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2006年

4 顧宇;冠狀動(dòng)脈鈣化與動(dòng)脈彈性功能相關(guān)性研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2007年

5 楊波;Testosterone抗心肌缺血復(fù)灌損傷的慢性與急性效應(yīng)[D];浙江大學(xué);2007年

6 聶海濤;重組人腦鈉素在畢赤酵母中的分泌表達(dá)[D];吉林大學(xué);2007年

7 薛鳳麟;NF-κB在AngⅡ調(diào)控HUVEC細(xì)胞生存/凋亡信號(hào)通路中的作用研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2007年

8 賀國(guó)洋;NF-kB mRNA在AngⅡ誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞生存/凋亡中表達(dá)研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2007年

9 劉辰庚;雌激素對(duì)Na～+，，K～+-ATPase β1亞單位、SERCA2a和IV型碳酸酐酶表達(dá)的影響[D];中南大學(xué);2007年

10 榮耀;慢性間歇缺氧致動(dòng)脈粥樣硬化兔模型的建立及機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2007年

本文編號(hào)：1238697