本文關鍵詞：穩(wěn)定過表達人SIRT1基因的HEK293細胞系的建立

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【摘要】：目的:構建人沉默信息調節(jié)因子2同源蛋白1(SIRT1)基因的真核表達載體,建立穩(wěn)定過表達人SIRT1的HEK293細胞系。方法:將含有SIRT1的克隆載體pCR Ⅱ-TOPO-SIRT1雙酶切后,連接至真核表達載體pcDNA3.1(+)中,連接產物經酶切鑒定后進行測序。構建的重組真核表達質粒pcDNA3.1(+)-SIRT1轉染HEK293細胞,G418進行篩選,Real-time PCR和Western Blot分別從mRNA和蛋白水平檢測SIRT1的表達。結果:酶切分析和測序結果證實,SIRT1基因成功插入真核表達質粒pcDNA3.1(+)中。Real-time PCR和Western Blot結果顯示穩(wěn)定轉染pc DNA3.1(+)-SIRT1的HEK293細胞SIRT1的表達水平明顯高于未轉染細胞(P㩳0.01)。結論:成功構建了真核表達載體pcDNA3.1(+)-SIRT1,并建立了穩(wěn)定過表達SIRT1基因的HEK293細胞系,為進一步研究SIRT1基因在心血管疾病中的作用及其機制奠定了基礎。
【作者單位】： 西安交通大學醫(yī)學院藥理系;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(編號:81072643)
【分類號】：R363
【正文快照】： 沉默信息調節(jié)因子2同源蛋白1(silent matingtype information regulation2homologue1,SIRT1)是一種NAD+依賴的組蛋白/非組蛋白去乙�；竅1]。SIRT1在不同的組織中廣泛表達,介導的細胞生理功能包括轉錄沉默、能量代謝和衰老等[2-4]。研究已證實SIRT1在動脈粥樣硬化、心肌炎損

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1 徐春華;劉遠厚;;鈣激活鉀通道α單位的研究現(xiàn)況[J];醫(yī)學綜述;2006年23期

2 王瑋;高衛(wèi)真;;線粒體與心肌細胞凋亡[J];醫(yī)學綜述;2007年20期

3 劉梅顏;胡大一;;關注心血管疾病患者的精神心理問題[J];中華全科醫(yī)師雜志;2007年10期

4 陳小弟;;心血管內科病人心理問題及對策分析[J];臨床醫(yī)藥實踐;2009年35期

5 余漢杰;;羅馬臨床醫(yī)學中的生物技術國際討論會簡介[J];瀘州醫(yī)學院學報;1987年04期

6 錢永如;沈錦;;氧自由基與小兒心血管疾病[J];國際兒科學雜志;1990年06期

7 尹瑞興;夏樹楹;;內皮素與心血管疾病[J];廣西醫(yī)科大學學報;1992年04期

8 朱小君，姚阿卿，劉勃，俞煒源，溫進坤，李岱宗，周愛儒，湯健;外源基因在大鼠體內不同組織的表達[J];中華醫(yī)學雜志;1994年03期

9 吳祥聲;降鈣素基因相關肽[J];國外醫(yī)學.臨床生物化學與檢驗學分冊;1994年05期

10 陳華東，丁克祥;硒自由基與老年心血管疾病[J];微量元素與健康研究;1996年01期

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1 郭永平;張敏芳;袁江姿;戴慧莉;錢家麒;;人臍動脈平滑肌細胞體外培養(yǎng)[A];2007年浙滬兩地腎臟病學術年會資料匯編[C];2007年

2 王應;張穎妹;韓文玲;馬大龍;;人CKLF1是人CC趨化因子受體4的功能配體[A];中國免疫學會第四屆學術大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

3 朱毅;;流體剪切力在血管內皮細胞中調節(jié)AMPK和SIRT1的機制研究[A];中國生理學會心血管生理學術研討會論文集[C];2011年

4 鄭嬋穎;楊巍;楊秀娟;邱爽;劉純青;段樹民;羅建紅;;NMDA受體的表面表達需要NR2亞單位第四跨膜區(qū)后的一段短肽[A];中國神經科學學會第六屆學術會議暨學會成立十周年慶祝大會論文摘要匯編[C];2005年

5 李輝;徐貴發(fā);Patrick Tso;;載脂蛋白A-IV的研究進展[A];山東營養(yǎng)學會營養(yǎng)與疾病學術研討會論文匯編[C];2006年

6 陳紹建;;中國被試的A型行為(TABP)特征研究[A];全國第七屆心理學學術會議文摘選集[C];1993年

7 張文娟;莊志雄;;SIRT1與衰老相關研究進展[A];第五屆廣東省環(huán)境誘變劑學會暨第三屆廣東省預防醫(yī)學會衛(wèi)生毒理專業(yè)委員會學術交流會論文集[C];2006年

8 彭佩芬;蔡德根;;硒與臨床[A];中國生理學會第21屆全國代表大會暨學術會議論文摘要匯編[C];2002年

9 李麗梅;;軀體疾病中的抑郁和焦慮[A];中國心理衛(wèi)生協(xié)會殘疾人心理衛(wèi)生分會第四屆學術交流會論文集[C];2002年

10 姜輝;田亞平;宋淑珍;;疾病防治與抗氧化劑應用[A];第六屆全國自由基生物學與自由基醫(yī)學學術會議和海峽兩岸自由基生物學與自由基醫(yī)學學術會議論文集[C];2004年

中國重要報紙全文數據庫 前10條

1 記者 崔立新;近九成住院冠心病患者有焦慮或抑郁情緒[N];中國人口報;2008年

2 高原;壓力過大會顯著增加患心血管疾病風險[N];中國中醫(yī)藥報;2008年

3 胡永東邋冀成君;從侯耀文病逝看心理病因[N];健康報;2007年

4 ;“炮轟”過度診療 倡導“雙心”健康[N];科學導報;2006年

5 崔翔宇;Ghrelin：其結構及生理學的重要性 Discovery of Ghrelin：Its Structure and Physiological Significance[N];中國醫(yī)藥報;2006年

6 記者 楊麗;北科搶占干細胞產業(yè)先機[N];泰州日報;2011年

7 本報特約撰稿人 劉元江;干細胞研究 有望沖破倫理樊籬[N];醫(yī)藥經濟報;2005年

8 孟慶普;專家研討“人體結垢”新觀點[N];健康報;2007年

9 劉文山;反式脂肪酸[N];家庭醫(yī)生報;2007年

10 余志平;靶向蛋白酶：成功、失敗與前景(一)[N];中國醫(yī)藥報;2006年

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1 李莉;SIRT1在血管平滑肌細胞增殖和新生內膜形成中的作用及分子機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2009年

2 陳金中;人類RBBP10和bima3的克隆和功能研究[D];復旦大學;2004年

3 耿義群;限制飲食對老年早期大鼠行為學和海馬組織學及SirT1和FoxO3a信號途徑的影響[D];汕頭大學;2007年

4 王淑霞;大鼠血管的增齡變化及其可能機制[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1997年

5 王華;血管緊張素II對血管內皮細胞整合素β3表達及轉錄調控的影響[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1999年

6 王英;人胚胎生殖細胞體外培養(yǎng)體系的建立及其向心肌前體細胞分化的初步研究[D];吉林大學;2007年

7 張敬各;同型半胱氨酸經DDAH/ADMA/NOS/NO通路損害血管內皮細胞的NO系統(tǒng)[D];四川大學;2007年

8 李秋霞;有氧運動通過eNOS增強的線粒體功能改善老年大鼠心肌胰島素抵抗[D];第四軍醫(yī)大學;2007年

9 高宇;血漿尾加壓素Ⅱ水平在相關疾病中變化的臨床和基礎研究[D];吉林大學;2009年

10 郭志堅;晚期糖基化終產物修飾的蛋白質對人血管內皮細胞的病理生物學作用及其機制的研究[D];第一軍醫(yī)大學;2002年

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1 趙潔明;鎘誘導細胞凋亡與Bcl-2抗凋亡機理研究[D];南京師范大學;2006年

2 趙宇豪;1、SIRT1在CIITA介導MHC Ⅱ轉錄激活中的作用 2、組蛋白甲基化轉移酶SUV39H2在心梗中的作用機制初探[D];南京醫(yī)科大學;2012年

3 古麗扎爾·買買提明;心理干預對老年冠心病介入治療患者情緒障礙的影響[D];新疆醫(yī)科大學;2006年

4 顧宇;冠狀動脈鈣化與動脈彈性功能相關性研究[D];大連醫(yī)科大學;2007年

5 楊波;Testosterone抗心肌缺血復灌損傷的慢性與急性效應[D];浙江大學;2007年

6 聶海濤;重組人腦鈉素在畢赤酵母中的分泌表達[D];吉林大學;2007年

7 薛鳳麟;NF-κB在AngⅡ調控HUVEC細胞生存/凋亡信號通路中的作用研究[D];昆明醫(yī)學院;2007年

8 賀國洋;NF-kB mRNA在AngⅡ誘導HUVEC細胞生存/凋亡中表達研究[D];昆明醫(yī)學院;2007年

9 劉辰庚;雌激素對Na～+，，K～+-ATPase β1亞單位、SERCA2a和IV型碳酸酐酶表達的影響[D];中南大學;2007年

10 榮耀;慢性間歇缺氧致動脈粥樣硬化兔模型的建立及機制研究[D];中南大學;2007年

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