發(fā)布時間：2017-11-30 06:36

  本文關(guān)鍵詞：人類細小病毒B19基因組NS1、VP1和VP2基因克隆及對宿主Ⅰ型干擾素信號通路的影響研究

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【摘要】：背景人類細小病毒B19 (Human parvovirus B19)是在1975年被首次發(fā)現(xiàn)的直徑只有23nnm的無包膜單鏈DNA病毒,主要通過呼吸道、血液、血液制品以及母嬰垂直傳播,呈全球性分布,春季是發(fā)病高峰期。在宿主感染B19病毒后,宿主首先產(chǎn)生IgM,這種免疫球蛋白可以持續(xù)大約3個月的時間,感染兩周后,宿主可以產(chǎn)生IgG,這種免疫球蛋白可以在宿主體內(nèi)持續(xù)終生。B19病毒的基因組主要包含三個開放閱讀框：NS1、VP1和VP2。本實驗室前期研究了B19病毒在我國獻血人群中的流行率,但是關(guān)于B19病毒對宿主固有免疫,特別是Ⅰ型干擾素信號通路的作用還沒有相關(guān)研究。目的在Hela細胞系中高表達NS1、VP1和VP2,研究高表達目的基因?qū)τ谒拗魃蓛?nèi)源性干擾素以及對于宿主Ⅰ型干擾素信號通路的影響。方法通過基因克隆將NS1、VP1和VP2分別克隆到表達載體pcDNA3.1-3tag上形成pcDNA3.1-3tag-NS1、pcDNA3.1-3tag-VP1和pcDNA3.1-3tag-VP2重組質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至Hela細胞,通過實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)(Real-time PCR,RT-PCR)以及免疫印跡(Western Blot, WB)的實驗方法分別檢測目的基因在mRNA和蛋白水平的表達。在確認目的基因可以在蛋白水平高表達后,我們通過RT-PCR檢測目的基因?qū)τ谒拗骷毎蓛?nèi)源性干擾素以及ISGs表達的影響；通過WB檢測目的基因?qū)TAT1磷酸化的影響；通過雙熒光報告基因檢測目的基因?qū)SRE活性的影響。結(jié)果成功克隆了NS1、VP1和VP2的重組質(zhì)粒,均能在細胞mRNA水平高表達,但只有NS1可以在蛋白水平高表達。轉(zhuǎn)染NS1后可以促進細胞生成內(nèi)源性干擾素,干擾素刺激后,NS1可以在STAT1磷酸化、ISRE活性以及ISGs表達三個層次抑制細胞Ⅰ型干擾素信號通路。結(jié)論NS1可以激活宿主固有免疫,刺激宿主細胞生成Ⅰ型干擾素,可以在p-STAT1、 ISRE活性和ISGs表達三個層次抑制Ⅰ型干擾素信號通路。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R373

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1 李臣賓;IFN-ω的研究進展[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);2005年01期

2 劉星;石賀欣;王琛;;干擾素調(diào)控因子3:細胞抗病毒反應(yīng)的核心轉(zhuǎn)錄因子[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2010年08期

3 曹雪濤;;E3泛素連接酶Nrdp1優(yōu)先促進TLR介導(dǎo)的Ⅰ型干擾素產(chǎn)生[J];中國基礎(chǔ)科學(xué);2010年03期

4 劉穎;趙興卉;張曉鵬;于蕊;吳詩坡;張哲;戴萌萌;付玲;侯利華;;EV71抑制Ⅰ型干擾素信號通路中ISGF3的核轉(zhuǎn)位[J];軍事醫(yī)學(xué);2013年10期

5 ;[J];;年期

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1 詹森林;張國良;鐘紅劍;金曉菲;林巧;張明霞;陳心春;周伯平;;不同結(jié)核分枝桿菌菌株對Ⅰ型干擾素基因的誘導(dǎo)作用及其在結(jié)核病患者外周血中的表達[A];中國防癆協(xié)會80周年紀念暨2013年全國學(xué)術(shù)大會論文集[C];2013年

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3 舒紅兵;;病毒感染誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控機制(英文)[A];第三屆細胞結(jié)構(gòu)與功能的信號基礎(chǔ)研討會論文摘要[C];2010年

4 梁淑娟;魏海明;田志剛;;IFNa通過STAT3、STAT1信號通路上調(diào)NK細胞的殺傷活性[A];山東免疫學(xué)會、山東微生物學(xué)會醫(yī)學(xué)微生物學(xué)專業(yè)委員會、山東省醫(yī)學(xué)會微生物學(xué)和免疫學(xué)專業(yè)委員會、山東省醫(yī)藥生物技術(shù)學(xué)會2001年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2001年

5 劉星光;姚鳴;李楠;王春梅;鄭媛媛;曹雪濤;;鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶Ⅱ通過結(jié)合并活化TAK1和IRF3加強巨噬細胞中TLR配體誘導(dǎo)的炎癥因子和Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2008年

6 徐紅梅;安華章;侯晉;韓超峰;王品;于益芝;曹雪濤;;磷脂酶PTP1B抑制MyD88和TRIF依賴的巨噬細胞炎性細胞因子和Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2008年

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1 錢錚;日美:發(fā)現(xiàn)可防止肌體干擾素過剩的酶[N];中國勞動保障報;2006年

2 高飛;HIV感染機理研究獲新進展[N];中國醫(yī)藥報;2003年

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1 李霞;DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶Dnmt3a促進Ⅰ型干擾素天然免疫應(yīng)答及其機制研究[D];浙江大學(xué);2014年

2 李姝;OTUB1和OTUB2對細胞抗病毒信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控機制[D];武漢大學(xué);2010年

3 舒揚;CDK5磷酸化DAI介導(dǎo)的神經(jīng)元Ⅰ型干擾素通路激活在帕金森病中的機制研究[D];華中科技大學(xué);2014年

4 李夏瑩;口蹄疫病毒VP1蛋白抑制細胞Ⅰ型干擾素產(chǎn)生的分子機理[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

5 張靜;TRIM32調(diào)控病毒誘導(dǎo)的Ⅰ型干擾素表達的分子機制[D];武漢大學(xué);2013年

6 張曉明;Ⅰ型干擾素和分泌IL-10的B細胞對新生期炎癥反應(yīng)的負調(diào)控[D];揚州大學(xué);2007年

7 占貞貞;磷酸酶PHLPP對TLR及RIG-I觸發(fā)的Ⅰ型干擾素產(chǎn)生的選擇性調(diào)控作用及機制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

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10 楊瑩韻;干擾素誘導(dǎo)基因IFIT家族分子促進Ⅰ型干擾素抗腫瘤作用及其機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

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1 張泉;豬腦心肌炎HB10株的3C蛋白酶對Ⅰ型干擾素信號通路的影響[D];長江大學(xué);2015年

2 武劍琴;人類細小病毒B19基因組NS1、VP1和VP2基因克隆及對宿主Ⅰ型干擾素信號通路的影響研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

3 陳倩;大鯢Ⅰ型干擾素基因的克隆、表達與抗病毒活性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 王品;micro-RNAs對Ⅰ型干擾素免疫效應(yīng)的調(diào)控作用與相關(guān)機制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

5 徐永妮;漢灘病毒感染HaCaT細胞誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素產(chǎn)生及其分子機制的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

6 許麗娜;鴨Ⅰ型干擾素基因的克隆及原核表達[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

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本文編號：1238345