發(fā)布時(shí)間：2017-11-28 16:09

  本文關(guān)鍵詞：梅毒包膜脂蛋白基因的克隆、表達(dá)及臨床抗體的檢測(cè)

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【摘要】：目的:克隆tp15、tp17、tp47、tp0453基因,構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒,進(jìn)行蛋白的表達(dá)、純化并用于檢測(cè)梅毒病人血清抗體。方法:PCR擴(kuò)增4個(gè)基因,構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)/tp15、pET28a(+)/tp17、pGEX-6P-1/tp47和pGEX-6P-1/tp0453,經(jīng)雙酶切及測(cè)序鑒定,將獲得的陽性克隆轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE電泳及Western blot分析鑒定,利用親和層析方法對(duì)4個(gè)蛋白進(jìn)行純化。將四個(gè)純化的蛋白固定到NC膜上,利用immuno-slot blot方法對(duì)梅毒病人血清進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:經(jīng)鑒定表明成功構(gòu)建四個(gè)原核表達(dá)質(zhì)粒。SDS-PAGE電泳及Western blot分析結(jié)果顯示四個(gè)重組蛋白大小正確。immuno-slot blot實(shí)驗(yàn)顯示四個(gè)蛋白能與梅毒病人血清特異性結(jié)合。結(jié)論:成功克隆、表達(dá)和純化了tp15、tp17、tp47、tp0453蛋白,四個(gè)蛋白可以與梅毒病人血清特異性結(jié)合,為進(jìn)一步建立梅毒病人血清檢測(cè)試劑盒奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 三峽大學(xué)分子生物學(xué)研究所;
【分類號(hào)】：R392.1
【正文快照】： 0引言梅毒是由梅毒螺旋體感染人體而發(fā)生的常見性傳播疾病,可累及全身各個(gè)器官且臨床表現(xiàn)千變?nèi)f化,侵襲力極強(qiáng),已經(jīng)成為繼艾滋病后最為嚴(yán)重的性傳播疾病,嚴(yán)重危害到人類的身體健康[1]。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,我們發(fā)現(xiàn)梅毒螺旋體的外膜脂蛋白作為重要的刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的

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