本文關(guān)鍵詞：沉默bim的表達對缺氧所致大鼠心肌細胞凋亡的影響

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【摘要】：目的:探討唯BH3域蛋白Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death)在缺氧所致大鼠心肌細胞凋亡中的作用。方法:在體外原代培養(yǎng)出生1～3 d的大鼠心肌細胞,并用抗α-橫紋肌肌動蛋白免疫組化法進行鑒定。設(shè)計并化學(xué)合成3對靶向bim的siRNA,用脂質(zhì)體法將siRNA轉(zhuǎn)染心肌細胞,篩選沉默效率最高的siRNA。實驗分組:(1)正常對照組;(2)缺氧組;(3)缺氧+脂質(zhì)體組;(4)缺氧+陰性對照siRNA組;(5)缺氧+bim-siRNA組。倒置顯微鏡下觀察心肌細胞的搏動頻率和節(jié)律。全自動生化分析術(shù)檢測細胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)的含量,用MTT法測定心肌細胞的存活率,流式細胞儀檢測細胞凋亡率。Western blotting檢測細胞Bim、Bax、Bcl-2和p-p38 MAPK和p38 MAPK蛋白的表達。結(jié)果:免疫組化鑒定證實大鼠心肌細胞原代培養(yǎng)成功。bim-siRNA轉(zhuǎn)染均能有效沉默bim基因的表達(P0.01),其中第2對沉默效率最高,達到86.73%。缺氧使心肌細胞的搏動頻率顯著減慢,節(jié)律不規(guī)則,而沉默bim基因的表達能使細胞搏動頻率增加。缺氧損傷導(dǎo)致細胞培養(yǎng)液中LDH含量較空白對照組明顯增加(P0.01),心肌細胞存活率明顯下降(P0.05),細胞凋亡率較空白對照組明顯增加(P0.01),轉(zhuǎn)染bim-siRNA后細胞培養(yǎng)液中LDH含量顯著減少,細胞存活率升高,細胞凋亡率下降。缺氧損傷導(dǎo)致心肌細胞Bax和p-p38 MAPK表達升高(P0.05或P0.01),Bcl-2蛋白表達下降(P0.01),bim-siRNA的轉(zhuǎn)染能夠抑制缺氧導(dǎo)致的上述改變(P0.01或P0.05),并且與心肌細胞凋亡發(fā)生率降低一致,p38 MAPK表達無明顯變化。結(jié)論:沉默bim的表達能有效抑制缺氧導(dǎo)致心肌細胞凋亡的作用,其機制可能與抑制Bax、p-p38 MAPK的表達和增強Bcl-2蛋白表達有關(guān),這有望為冠心病的治療提供新方向。
【作者單位】： 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院心內(nèi)科 江西省分子中心醫(yī)學(xué)重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81060013)
【分類號】：R363
【正文快照】： 冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(coronary athero-sclerotic heart disease),由于冠狀動脈管腔粥樣硬化而狹窄或阻塞,導(dǎo)致心肌缺血和缺氧而引起的心臟病,具有較高的致病率和致死率。心絞痛、心肌梗死和缺血性心臟病等共同的病理基礎(chǔ)都是心肌缺血缺氧,導(dǎo)致細胞凋亡[1]。因此,如何保

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