發(fā)布時(shí)間：2017-11-24 12:13

  本文關(guān)鍵詞：沉默bim的表達(dá)對(duì)缺氧所致大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響

  更多相關(guān)文章： Bim蛋白 小干擾RNA 心肌細(xì)胞 缺氧 細(xì)胞凋亡 p絲裂原激活蛋白激酶類(lèi)

【摘要】：目的:探討唯BH3域蛋白Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death)在缺氧所致大鼠心肌細(xì)胞凋亡中的作用。方法:在體外原代培養(yǎng)出生1～3 d的大鼠心肌細(xì)胞,并用抗α-橫紋肌肌動(dòng)蛋白免疫組化法進(jìn)行鑒定。設(shè)計(jì)并化學(xué)合成3對(duì)靶向bim的siRNA,用脂質(zhì)體法將siRNA轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞,篩選沉默效率最高的siRNA。實(shí)驗(yàn)分組:(1)正常對(duì)照組;(2)缺氧組;(3)缺氧+脂質(zhì)體組;(4)缺氧+陰性對(duì)照siRNA組;(5)缺氧+bim-siRNA組。倒置顯微鏡下觀(guān)察心肌細(xì)胞的搏動(dòng)頻率和節(jié)律。全自動(dòng)生化分析術(shù)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)的含量,用MTT法測(cè)定心肌細(xì)胞的存活率,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。Western blotting檢測(cè)細(xì)胞Bim、Bax、Bcl-2和p-p38 MAPK和p38 MAPK蛋白的表達(dá)。結(jié)果:免疫組化鑒定證實(shí)大鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)成功。bim-siRNA轉(zhuǎn)染均能有效沉默bim基因的表達(dá)(P0.01),其中第2對(duì)沉默效率最高,達(dá)到86.73%。缺氧使心肌細(xì)胞的搏動(dòng)頻率顯著減慢,節(jié)律不規(guī)則,而沉默bim基因的表達(dá)能使細(xì)胞搏動(dòng)頻率增加。缺氧損傷導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH含量較空白對(duì)照組明顯增加(P0.01),心肌細(xì)胞存活率明顯下降(P0.05),細(xì)胞凋亡率較空白對(duì)照組明顯增加(P0.01),轉(zhuǎn)染bim-siRNA后細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH含量顯著減少,細(xì)胞存活率升高,細(xì)胞凋亡率下降。缺氧損傷導(dǎo)致心肌細(xì)胞Bax和p-p38 MAPK表達(dá)升高(P0.05或P0.01),Bcl-2蛋白表達(dá)下降(P0.01),bim-siRNA的轉(zhuǎn)染能夠抑制缺氧導(dǎo)致的上述改變(P0.01或P0.05),并且與心肌細(xì)胞凋亡發(fā)生率降低一致,p38 MAPK表達(dá)無(wú)明顯變化。結(jié)論:沉默bim的表達(dá)能有效抑制缺氧導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡的作用,其機(jī)制可能與抑制Bax、p-p38 MAPK的表達(dá)和增強(qiáng)Bcl-2蛋白表達(dá)有關(guān),這有望為冠心病的治療提供新方向。
【作者單位】： 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院心內(nèi)科 江西省分子中心醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81060013)
【分類(lèi)號(hào)】：R363
【正文快照】： 冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(coronary athero-sclerotic heart disease),由于冠狀動(dòng)脈管腔粥樣硬化而狹窄或阻塞,導(dǎo)致心肌缺血和缺氧而引起的心臟病,具有較高的致病率和致死率。心絞痛、心肌梗死和缺血性心臟病等共同的病理基礎(chǔ)都是心肌缺血缺氧,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[1]。因此,如何保

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