本文關(guān)鍵詞：腸道病毒71型的全長(zhǎng)cDNA感染性克隆的構(gòu)建與鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建一株腸道病毒71型的全長(zhǎng)cDNA克隆并驗(yàn)證感染性。方法用長(zhǎng)片段高保真RT-PCR方法擴(kuò)增腸道病毒71型87-2008 Xi'an株的cDNA,裝入pBR322載體。將該克隆線性化,體外轉(zhuǎn)錄后轉(zhuǎn)染RD細(xì)胞后,通過(guò)觀察CPE及RT-PCR驗(yàn)證其感染性。隨后利用空斑法測(cè)定拯救病毒的一步生長(zhǎng)曲線。結(jié)果成功構(gòu)建了腸道病毒71型87-2008 Xi'an株的全長(zhǎng)cDNA克隆;體外轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)染RD細(xì)胞60 h后可觀察到明顯的CPE現(xiàn)象;RT-PCR在轉(zhuǎn)染RD細(xì)胞中檢測(cè)到病毒的存在;成功利用空斑法測(cè)定了拯救病毒的一步生長(zhǎng)曲線,最大滴度達(dá)到2×107pfu/mL。結(jié)論成功構(gòu)建了腸道病毒71型87-2008 Xi'an株的全長(zhǎng)cDNA克隆并驗(yàn)證了其感染性,同時(shí)測(cè)定了拯救病毒的一步生長(zhǎng)曲線,與野生型病毒相近。
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31071203)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 近年來(lái)手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)感染在世界各地屢有報(bào)道[1-4],在2008年中國(guó)大陸有488 955人感染手足口病并導(dǎo)致其中126人死亡,而死亡病例中的絕大多數(shù)為腸道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染所導(dǎo)致[5]。由此可見手足口病的流行已給我國(guó)嬰幼兒群體的健康

【相似文獻(xiàn)】

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7 郭t，

本文編號(hào)：1215785