本文關(guān)鍵詞：利用SUMO表達(dá)系統(tǒng)高效可溶表達(dá)人白細(xì)胞介素15及其活性研究

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【摘要】：目的:探討重組人白細(xì)胞介素15(rhIL-15)的表達(dá)條件、純化工藝并進(jìn)行生物活性鑒定。方法:采用RT-PCR方法從正常成人外周血淋巴細(xì)胞中擴(kuò)增出人白細(xì)胞介素15(hIL-15)cDNA,克隆到pSUMO Vector中,構(gòu)建rpSUMOhIL-15重組質(zhì)粒。將轉(zhuǎn)化重組質(zhì)粒的工程菌誘導(dǎo)表達(dá),超聲破碎后取菌液上清,經(jīng)過親和層析、酶切、親和層析得到成熟蛋白。高效液相色譜進(jìn)行純度分析;利用rhIL-15促進(jìn)T細(xì)胞增殖、rhIL-15誘生的NK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的能力鑒定其生物活性;荷瘤鼠實(shí)驗(yàn)研究rhIL-15抗腫瘤作用。結(jié)果:經(jīng)純化后得到rhIL-15,其分子量大小為14.4 kD,蛋白純度在95%以上,具有顯著刺激T細(xì)胞增殖和NK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞效果。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示其具有明顯的抗腫瘤作用。結(jié)論:經(jīng)過純化獲得高純度和高生物學(xué)活性的rhIL-15,且具有明顯增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷、刺激T細(xì)胞增殖和抗腫瘤的活性,為細(xì)胞因子聯(lián)合其他方法治療腫瘤等疾病提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物制藥教研室;
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 白細(xì)胞介素15(IL-15)是1994年Grabstein等[1]發(fā)現(xiàn)的一種新的細(xì)胞因子,可由活化的單核-巨噬細(xì)胞、表皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生[2]。IL-15前體分子由162個(gè)氨基酸組成,先導(dǎo)序列較長為48個(gè)氨基酸殘基,成熟分子114個(gè)氨基酸殘基,分子量14～15 kD。IL-15具有類似IL-2的結(jié)構(gòu)

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本文編號(hào)：1211896