本文關鍵詞：金黃色葡萄球菌RsmA蛋白以及釀酒酵母ISW2染色體重塑復合物的結構初探

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【摘要】：1.金黃色葡萄球菌RsmA蛋白的初步晶體學研究金黃色葡萄球菌是一種重要的致病菌,是人類化膿感染中最常見的病原菌,能夠引起局部化膿感染。抑制金黃色葡萄球菌感染的一種方式是抑制其相關毒性蛋白及毒性分子的表達。RsmA蛋白是金黃色葡萄球菌中的一種16S rRNA小亞基甲基轉移酶,負責將16S rRNA 3’端第一個發(fā)卡結構區(qū)兩個連續(xù)的腺嘌呤進行甲基化,并且能夠使每個腺嘌呤第6位的氮原子發(fā)生一個雙甲基化反應。研究發(fā)現(xiàn)RsmA蛋白的缺失會影響30S小亞基的生物合成,進而影響到蛋白質的相關翻譯過程。對于該部分研究試圖通過結構生物學的方法探究RsmA蛋白催化腺嘌呤發(fā)生雙甲基化的結構基礎,通過結構分析找到RsmA上潛在的靶向小分子藥物位點,通過設計藥物來抑制金黃色葡萄球菌感染。于是我們進行了RsmA蛋白的克隆、表達、純化并對Native和SeMet-RsmA蛋白進行了晶體生長,收到了一套3.2 A的數據,通過數據處理了解了RsmA蛋白的一些初步晶體學數據,通過ITC實驗檢測了RsmA對SAM和SAH的結合,并進行了RsmA與SAM和SAH的共結晶,通過晶體篩選獲得了復合物的晶體,但質量并不高有待進一步優(yōu)化。2.釀酒酵母中的ISW2染色體重塑復合物的結構探索真核生物體內,染色質以核小體的形式存在,這種包裝結構非常緊密,使得轉錄調控蛋白不能結合到DNA上,影響基因的表達。ATP依賴的染色體重塑復合物可以利用ATP水解釋放的能量對核小體進行移動,組裝,替換,進而導致細胞中染色質的結構發(fā)生改變,對基因的表達情況起到調控作用。在釀酒酵母中存在一種保守的ATP依賴的染色體重塑復合物ISWI家族,包含有ISWl和ISW2兩種主要的重塑復合物。其中ISW2染色體重塑復合物含有iSW2、Itc1、Dpb4和Dlsl四個組分,該復合物可以調控核小體串聯(lián)的間隔,發(fā)揮重塑功能。相比于ISWl,ISW2蛋白在發(fā)生重塑過程中對于核小體間的鏈接DNA的長度是沒有要求的,并且對于核小體的結構不會起到破壞作用。對于這部分工作,嘗試通過解析該復合物及其各組分的結構來探究其重塑的機理。我們對于ISW2各個組分進行了克隆、表達、純化并進行了晶體生長,獲得了Isw2單體的晶體。通過EMSA實驗和pull-down實驗探究了Isw2和Dpb4+Dls1對于雙鏈DNA的結合能力以及Isw2與Dpb4+Dls1相互作用的片段,嘗試了Isw2、Dpb4+Dls1+dsD NA和Isw2片段-Dpb4+Dls1的共晶。與此同時對得到的晶體進行了優(yōu)化以及衍射數據的收集,希望得到結構信息。
【學位授予單位】：中國科學技術大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R378;Q93

【共引文獻】

中國期刊全文數據庫 前1條

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中國博士學位論文全文數據庫 前4條

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中國碩士學位論文全文數據庫 前2條

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本文編號：1204962