本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌RsmA蛋白以及釀酒酵母ISW2染色體重塑復(fù)合物的結(jié)構(gòu)初探

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【摘要】：1.金黃色葡萄球菌RsmA蛋白的初步晶體學(xué)研究金黃色葡萄球菌是一種重要的致病菌,是人類化膿感染中最常見的病原菌,能夠引起局部化膿感染。抑制金黃色葡萄球菌感染的一種方式是抑制其相關(guān)毒性蛋白及毒性分子的表達(dá)。RsmA蛋白是金黃色葡萄球菌中的一種16S rRNA小亞基甲基轉(zhuǎn)移酶,負(fù)責(zé)將16S rRNA 3’端第一個發(fā)卡結(jié)構(gòu)區(qū)兩個連續(xù)的腺嘌呤進(jìn)行甲基化,并且能夠使每個腺嘌呤第6位的氮原子發(fā)生一個雙甲基化反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)RsmA蛋白的缺失會影響30S小亞基的生物合成,進(jìn)而影響到蛋白質(zhì)的相關(guān)翻譯過程。對于該部分研究試圖通過結(jié)構(gòu)生物學(xué)的方法探究RsmA蛋白催化腺嘌呤發(fā)生雙甲基化的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ),通過結(jié)構(gòu)分析找到RsmA上潛在的靶向小分子藥物位點,通過設(shè)計藥物來抑制金黃色葡萄球菌感染。于是我們進(jìn)行了RsmA蛋白的克隆、表達(dá)、純化并對Native和SeMet-RsmA蛋白進(jìn)行了晶體生長,收到了一套3.2 A的數(shù)據(jù),通過數(shù)據(jù)處理了解了RsmA蛋白的一些初步晶體學(xué)數(shù)據(jù),通過ITC實驗檢測了RsmA對SAM和SAH的結(jié)合,并進(jìn)行了RsmA與SAM和SAH的共結(jié)晶,通過晶體篩選獲得了復(fù)合物的晶體,但質(zhì)量并不高有待進(jìn)一步優(yōu)化。2.釀酒酵母中的ISW2染色體重塑復(fù)合物的結(jié)構(gòu)探索真核生物體內(nèi),染色質(zhì)以核小體的形式存在,這種包裝結(jié)構(gòu)非常緊密,使得轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白不能結(jié)合到DNA上,影響基因的表達(dá)。ATP依賴的染色體重塑復(fù)合物可以利用ATP水解釋放的能量對核小體進(jìn)行移動,組裝,替換,進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞中染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,對基因的表達(dá)情況起到調(diào)控作用。在釀酒酵母中存在一種保守的ATP依賴的染色體重塑復(fù)合物ISWI家族,包含有ISWl和ISW2兩種主要的重塑復(fù)合物。其中ISW2染色體重塑復(fù)合物含有iSW2、Itc1、Dpb4和Dlsl四個組分,該復(fù)合物可以調(diào)控核小體串聯(lián)的間隔,發(fā)揮重塑功能。相比于ISWl,ISW2蛋白在發(fā)生重塑過程中對于核小體間的鏈接DNA的長度是沒有要求的,并且對于核小體的結(jié)構(gòu)不會起到破壞作用。對于這部分工作,嘗試通過解析該復(fù)合物及其各組分的結(jié)構(gòu)來探究其重塑的機(jī)理。我們對于ISW2各個組分進(jìn)行了克隆、表達(dá)、純化并進(jìn)行了晶體生長,獲得了Isw2單體的晶體。通過EMSA實驗和pull-down實驗探究了Isw2和Dpb4+Dls1對于雙鏈DNA的結(jié)合能力以及Isw2與Dpb4+Dls1相互作用的片段,嘗試了Isw2、Dpb4+Dls1+dsD NA和Isw2片段-Dpb4+Dls1的共晶。與此同時對得到的晶體進(jìn)行了優(yōu)化以及衍射數(shù)據(jù)的收集,希望得到結(jié)構(gòu)信息。
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R378;Q93

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 曹琳;張弛;安增選;朱炎;;肌動蛋白相關(guān)蛋白ARP5調(diào)控氣孔發(fā)育的表觀遺傳機(jī)制研究[J];復(fù)旦學(xué)報(自然科學(xué)版);2014年04期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 曾瑜;ARID1A在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及對其生物學(xué)行為影響[D];中南大學(xué);2013年

2 李晶;PI3K/AKT和MEK/ERK通路調(diào)控H3K27me3甲基化酶和去甲基化酶基因表達(dá)的研究[D];石河子大學(xué);2013年

3 鄒保紅;染色質(zhì)修飾基因HUB1和CHR5及轉(zhuǎn)錄因子MYB44在擬南芥防衛(wèi)反應(yīng)中的功能研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

4 陳德偉;Brg1和Brm對CAMs和ET-1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控及其在低氧性肺動脈高壓中的作用和機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 陳吉剛;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激上調(diào)SET7/9表達(dá)機(jī)制及其在糖尿病腎病中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

2 鐘曉超;水稻組蛋白末端修飾酶OsSRT1和JMJ706的功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

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本文編號：1204962