本文關(guān)鍵詞：抗B型葡萄球菌腸毒素高親和力單鏈抗體的制備

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【摘要】：目的構(gòu)建針對B型葡萄球菌腸毒素(SEB)的特異性單鏈抗體(scFv),并進行純化和鑒定。方法設(shè)計抗SEB高親和力單克隆抗體(mAb)FMU-SEB-No.2重鏈和輕鏈可變區(qū)基因片段VH和VL的引物,利用RT-PCR技術(shù),從本室制備的抗SEBmAb FMU-SEB-No.2雜交瘤細胞株中擴增出VH和VL基因片段;然后通過在輕鏈引物上設(shè)計linker序列,重疊引物延伸法(SOE)將VH和VL基因拼接成scFv基因片段,并將其克隆入原核表達載體PGEX4T-1中;轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3)感受態(tài)細胞,IPTG誘導(dǎo)表達,融合蛋白經(jīng)谷胱甘肽親和層吸柱純化。采用SDS-PAGE,Western blot,ELISA等方法對其表達水平和特異性進行分析。結(jié)果成功從1株抗SEB mAb FMU-SEB-No.2雜交瘤細胞株中擴增出VH和VL可變區(qū)基因,并通過linker序列將其拼接成scFv片段,大小約750 bp,編碼250個氨基酸。PCR、酶切鑒定和測序結(jié)果表明表達載體構(gòu)建成功。轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,以可溶形式表達相對分子質(zhì)量(Mr)約54 000的融合蛋白。經(jīng)谷胱甘肽親和層析法純化融合蛋白,可獲得純度達90%以上的scFv,ELISA和Western blot法檢測結(jié)果表明,可溶性scFv與抗原SEB有較強的結(jié)合活性。結(jié)論成功構(gòu)建并表達出抗SEB的特異性單鏈抗體。
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系;
【基金】：新藥創(chuàng)制科技重大專項(2008ZXJ09003-009,2012ZX09J12106-02B)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： B型葡萄球菌腸毒素(staphylococal enterotoxinB,SEB)毒性大、極少量毒素侵入人或動物機體便會中毒,對人、動物及環(huán)境構(gòu)成極大威脅[1]。1.7μg的SEB就可殺死一個成年人,是被列入聯(lián)合國《禁止生物武器公約》核查清單的11種生物毒素之一。美軍10年來的毒素戰(zhàn)劑防治研究規(guī)劃始終

【參考文獻】

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【相似文獻】

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本文編號：1192945