本文關(guān)鍵詞：干擾NaV1.9對(duì)RAW264.7細(xì)胞增殖、吞噬和遷移的影響

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【摘要】：目的應(yīng)用RNA干擾技術(shù)沉默RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞中電壓門控性鈉通道(VGSCs/NaVs)α亞單位NaV1.9基因,建立穩(wěn)定干擾細(xì)胞株,并觀察其對(duì)細(xì)胞增殖活性、吞噬能力和遷移功能的影響。方法通過LipofectamineTM2000將短發(fā)夾RNA(shRNA)干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至RAW264.7細(xì)胞,經(jīng)G418篩選獲得穩(wěn)定細(xì)胞株。用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)鑒定干擾效率,CCK-8法測(cè)定穩(wěn)定細(xì)胞株的增殖活性,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的細(xì)胞周期及吞噬能力,Transwell小室法檢測(cè)細(xì)胞的遷移功能。結(jié)果成功建立穩(wěn)定干擾NaV1.9的細(xì)胞株,RT-PCR法鑒定干擾效率達(dá)80%。CCK-8法及流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,降低NaV1.9的表達(dá)使細(xì)胞增殖活性下降(P0.05);流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,抑制NaV1.9的表達(dá)使細(xì)胞吞噬能力降低(P0.05);Transwell小室法結(jié)果顯示,干擾NaV1.9的表達(dá)使細(xì)胞遷移能力減弱(P0.05)。結(jié)論建立了穩(wěn)定干擾NaV1.9的RAW264.7細(xì)胞株,下調(diào)NaV1.9的表達(dá)使巨噬細(xì)胞增殖活性、吞噬能力和遷移功能顯著降低。
【作者單位】： 天津醫(yī)科大學(xué)研究生院;武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院心血管病研究所心臟中心;武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸與重癥醫(yī)學(xué)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81070121,81170238) 天津市自然科學(xué)基金(09ZCZDSF04200,11JCYBJC12000)
【分類號(hào)】：R363
【正文快照】： 巨噬細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要組成部分,參與先天性和后天性免疫反應(yīng)。巨噬細(xì)胞具有異質(zhì)性,按照細(xì)胞表型和功能可為:經(jīng)典型(具有促進(jìn)炎癥的表型,酶解、吞噬、遷移能力較強(qiáng))和非經(jīng)典型(具有抑制炎癥的表型,能夠分泌多種細(xì)胞因子,促進(jìn)組織新生和炎癥消退),在生理、病理過程的不同階

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4 本報(bào)特約撰稿 袁s，

本文編號(hào)：1189319