發(fā)布時(shí)間：2017-11-13 11:23

  本文關(guān)鍵詞：海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)與純度鑒定方法的優(yōu)化

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【摘要】：目的:通過優(yōu)化和改進(jìn)傳統(tǒng)的神經(jīng)元培養(yǎng)方法,探討一個(gè)簡(jiǎn)單、高純度的大鼠胚胎海馬神經(jīng)元的原代培養(yǎng)及活性檢測(cè)方法。方法:頸椎脫臼處死孕鼠,迅速取海馬,剝離血管網(wǎng)等結(jié)締組織后,消化并吹打制成細(xì)胞懸液,以適當(dāng)?shù)拿芏冉臃N入DMEM/HG培養(yǎng)基,4h后換用Neurobasal培養(yǎng)基,以后每2-3d進(jìn)行1/3量換液。倒置顯微鏡觀察神經(jīng)元的形態(tài)變化,并采用CCK-8試劑盒檢測(cè)神經(jīng)元活性和神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)鑒定神經(jīng)元純度。結(jié)果:細(xì)胞接種4h后貼壁,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)神經(jīng)元的形態(tài)發(fā)生一系列變化,從圓形、透亮、體積小逐漸變?yōu)闄E圓形、三角形或椎形,有光暈,胞體增大,突起伸長(zhǎng)且分支增多,在培養(yǎng)第4天后逐漸連接呈網(wǎng)絡(luò)狀。神經(jīng)元純度隨時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高,培養(yǎng)第7天純度高達(dá)90%以上。神經(jīng)元在培養(yǎng)的第9、10天達(dá)到成熟,即可用于后續(xù)研究。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)便易行,神經(jīng)元純度高、細(xì)胞活性好,體外存活時(shí)間長(zhǎng),是體外研究的良好實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?值得推廣應(yīng)用。
【作者單位】： 武漢大學(xué)人民醫(yī)院;杭州市第七人民醫(yī)院;
【基金】：十二五國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):2012BAI01B05)
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： 海馬是哺乳動(dòng)物大腦邊緣系統(tǒng)的重要組成部分,主要參與學(xué)習(xí)、記憶、情緒反應(yīng)等多種功能活動(dòng),與許多神經(jīng)精神疾病的發(fā)生密切相關(guān)。因此,海馬神經(jīng)元是研究神經(jīng)系統(tǒng)疾病、精神疾病的發(fā)病機(jī)制等的重要手段[1-3]。Banker等人在1977年首次成功的在體外分離并培養(yǎng)了海馬神經(jīng)元[4],此

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本文編號(hào)：1180452