本文關(guān)鍵詞：靶向UL27shRNA抑制Ⅱ型單純皰疹病毒在HEK293細(xì)胞中的復(fù)制

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【摘要】：按照shRNA(small hairpin RNA)設(shè)計(jì)原則,針對(duì)Ⅱ型單純皰疹病毒(herpes simplex virus type2,HSV-2)的UL27基因序列保守區(qū)域篩選設(shè)計(jì)、合成4條干擾靶序列并構(gòu)建表達(dá)UL27序列特異性siRNA(short interfering RNA)的質(zhì)粒載體pGPU6/GFP/Neo.通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞(human embryonic kidney 293 cell)再接種HSV-2.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-timefluorescent quantitative PCR)技術(shù)檢測(cè)UL27各組的mRNA轉(zhuǎn)錄水平,終點(diǎn)滴定法檢測(cè)細(xì)胞上清液中的病毒滴度,四甲基偶氮唑鹽(four methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法測(cè)定細(xì)胞存活率,Western印跡法檢測(cè)蛋白表達(dá)效果.結(jié)果顯示,UL27shRNA75組對(duì)UL27基因mRNA表達(dá)抑制效果最佳,同時(shí)能顯著抑制感染細(xì)胞的CPE(cytopathic effect,CPE),降低上清液中的病毒感染滴度,提高細(xì)胞的生存率,抑制UL27基因的蛋白表達(dá).提示本研究構(gòu)建的pGPU6/GFP/Neo-UL27表達(dá)載體能在細(xì)胞水平上不同程度地干擾HSV-2 UL27基因表達(dá),抑制HSV-2在HEK293細(xì)胞中復(fù)制.
【作者單位】： 遵義醫(yī)學(xué)院珠海校區(qū)、生化教研室;
【基金】：貴州省科學(xué)技術(shù)基金(黔科合J字No.[2008]2313號(hào)) 貴州省優(yōu)秀科技教育人才省長(zhǎng)專項(xiàng)資金項(xiàng)目(黔省專合字No.(2009)122號(hào))資助~~
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： Ⅱ型單純皰疹病毒(herpes simplex virus type 2,HSV-2)是生殖器皰疹(genital herpes,GH)的主要病原體.HSV-2一旦感染將終身潛伏在骶神經(jīng)節(jié)[1-2].近年來(lái)的研究認(rèn)為,Ⅱ型單純皰疹病毒感染和艾滋病[3]、宮頸癌的發(fā)病密切相關(guān)性[4-7].國(guó)內(nèi)外研究顯示,HSV-2患病率呈不斷上升趨勢(shì)[8

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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