本文關鍵詞：抗卵泡刺激素受體納米抗體的制備及鑒定

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【摘要】：目的獲得抗卵泡刺激素受體(FSHR)的納米抗體。方法使用原核表達的重組蛋白His-FSHR234對新疆雙峰駝單域抗體噬菌體展示文庫進行親和篩選,將篩選獲得的重鏈抗體的可變區(qū)(vhh)基因亞克隆至pET30a表達載體,轉化E.coli BL21(DE3),IPTG誘導表達VHH重組蛋白,鎳離子親和層析柱純化獲得納米抗體。ELISA檢測納米抗體的抗原結合活性。結果 His-FSHR234篩選富集后,隨機挑選40個克隆進行鑒定,其中28個為陽性克隆,挑選4個vhh基因進行克隆,PCR和酶切鑒定目的基因大小與預計相符。SDS-PAGE顯示,VHH FSHR-06、VHH FSHR-25、VHH FSHR-30、VHH FSHR-50分別在相對分子質量(M r)31 000、26 000、25 000、26 000有目的條帶。ELISA檢測顯示,4個納米抗體對His-FSHR234重組蛋白均具有結合活性,其中VHH FSHR-06的抗原結合活性最高。結論從新疆雙峰駝單域抗體噬菌體展示文庫中篩選獲得了1個具有較高抗原結合活性的抗FSHR的納米抗體。
【作者單位】： 新疆大學生命科學與技術學院 新疆生物資源基因工程重點實驗室;
【基金】：新疆自治區(qū)高技術研究發(fā)展項目(201110102) 國家自然科學基金(81260333)
【分類號】：R392.1
【正文快照】： 卵泡刺激素受體(follicle-stimulating hormone re-ceptor,FSHR)是一種跨膜糖蛋白,屬于G蛋白偶聯(lián)受體超家族中的糖蛋白亞家族成員。在成年人和動物中,FSHR僅特異性表達在睪丸支持細胞和卵巢粒層細胞表面,并且低表達于睪丸和卵巢血管內皮細胞[1]。先前對FSHR與腫瘤相關的研究主

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本文編號：1167565