本文關(guān)鍵詞：抗卵泡刺激素受體納米抗體的制備及鑒定

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【摘要】：目的獲得抗卵泡刺激素受體(FSHR)的納米抗體。方法使用原核表達(dá)的重組蛋白His-FSHR234對(duì)新疆雙峰駝單域抗體噬菌體展示文庫(kù)進(jìn)行親和篩選,將篩選獲得的重鏈抗體的可變區(qū)(vhh)基因亞克隆至pET30a表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá)VHH重組蛋白,鎳離子親和層析柱純化獲得納米抗體。ELISA檢測(cè)納米抗體的抗原結(jié)合活性。結(jié)果 His-FSHR234篩選富集后,隨機(jī)挑選40個(gè)克隆進(jìn)行鑒定,其中28個(gè)為陽(yáng)性克隆,挑選4個(gè)vhh基因進(jìn)行克隆,PCR和酶切鑒定目的基因大小與預(yù)計(jì)相符。SDS-PAGE顯示,VHH FSHR-06、VHH FSHR-25、VHH FSHR-30、VHH FSHR-50分別在相對(duì)分子質(zhì)量(M r)31 000、26 000、25 000、26 000有目的條帶。ELISA檢測(cè)顯示,4個(gè)納米抗體對(duì)His-FSHR234重組蛋白均具有結(jié)合活性,其中VHH FSHR-06的抗原結(jié)合活性最高。結(jié)論從新疆雙峰駝單域抗體噬菌體展示文庫(kù)中篩選獲得了1個(gè)具有較高抗原結(jié)合活性的抗FSHR的納米抗體。
【作者單位】： 新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 新疆生物資源基因工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：新疆自治區(qū)高技術(shù)研究發(fā)展項(xiàng)目(201110102) 國(guó)家自然科學(xué)基金(81260333)
【分類號(hào)】：R392.1
【正文快照】： 卵泡刺激素受體(follicle-stimulating hormone re-ceptor,FSHR)是一種跨膜糖蛋白,屬于G蛋白偶聯(lián)受體超家族中的糖蛋白亞家族成員。在成年人和動(dòng)物中,FSHR僅特異性表達(dá)在睪丸支持細(xì)胞和卵巢粒層細(xì)胞表面,并且低表達(dá)于睪丸和卵巢血管內(nèi)皮細(xì)胞[1]。先前對(duì)FSHR與腫瘤相關(guān)的研究主

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本文編號(hào)：1167565