本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞動(dòng)脈靶向移植對(duì)兔急性腎小管壞死模型的治療研究

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【摘要】：目的：掌握實(shí)驗(yàn)兔急性腎小管壞死模型的建立與自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的獲取、制備和培養(yǎng)方法。采用經(jīng)腎動(dòng)脈靶向灌注移植兔自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,與未治療對(duì)照組比較,觀察移植后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)缺血再灌注損傷引起的急性腎小管壞死的修復(fù)作用及其對(duì)腎功能恢復(fù)的影響。為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療急性腎小管壞死的臨床應(yīng)用推廣提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：1、實(shí)驗(yàn)兔自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的獲取與培養(yǎng)：8只健康日本大耳白兔,體質(zhì)量2±0.5Kg,隨機(jī)分成兩組(BM-MSCs移植組和對(duì)照組),每組各4只;模型建立前所有實(shí)驗(yàn)兔均采血行血肌酐、尿素氮檢測(cè)并記錄。在模型建立后24h移植組與對(duì)照組各隨機(jī)選1只兔處死,切除腎臟行病理學(xué)觀察。移植組其余3只兔在無(wú)菌條件下采集骨髓各5ml,以貼壁培養(yǎng)法分離自體BM-MSCs并進(jìn)行原代及傳代培養(yǎng),培養(yǎng)過(guò)程中進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察。隨機(jī)選取其中一瓶P2代細(xì)胞做(4,6-聯(lián)脒-2-苯基吲哚4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)標(biāo)記并在顯微鏡下觀察。2、建立實(shí)驗(yàn)兔急性腎小管壞死模型：采用缺血再灌注損傷機(jī)制建立模型。全部實(shí)驗(yàn)兔在無(wú)菌靜脈麻醉狀態(tài)下,開(kāi)腹鈍性分離雙側(cè)腎動(dòng)脈,采用無(wú)損傷血管鉗夾閉雙腎動(dòng)脈90min,觀察腎臟變化(包括體積、顏色、外觀形態(tài)等),去夾恢復(fù)腎動(dòng)脈血流灌注。模型建立后24h,對(duì)照組及移植組各隨機(jī)選取1只實(shí)驗(yàn)兔處死并取腎組織,病理學(xué)觀察腎小管壞死情況；建立模型后3小時(shí)、24小時(shí)檢測(cè)血肌酐和尿素氮水平并記錄。通過(guò)觀察血生化指標(biāo)變化與病理學(xué)改變,確定腎小管壞死模型建立成功。3、動(dòng)脈靶向灌注兔自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并與對(duì)照組對(duì)比觀察：(1)移植組(3只)：麻醉下開(kāi)腹分離腹主動(dòng)脈下段(約齊雙側(cè)髂總動(dòng)脈分叉部上方)采用Sel dinger穿刺技術(shù),插入3F Progreat微導(dǎo)管約5cm至腎動(dòng)脈開(kāi)口水平,緩慢灌注兔自體BM-MSCs懸液2ml/kg,退微導(dǎo)管及導(dǎo)管鞘,穿刺點(diǎn)采用可吸收性無(wú)損傷縫合線(xiàn)縫合,待無(wú)出血、滲血后逐層關(guān)腹。(2)對(duì)照組(3只),與移植組在同一時(shí)間點(diǎn),經(jīng)腹股溝內(nèi)側(cè)靜脈緩慢注入等量生理鹽水作對(duì)比組觀察。(3)兩組間對(duì)比觀察：移植BM-MSCs術(shù)后,兩組分別于3d、5d、7d采血檢測(cè)血肌酐、尿素氮,對(duì)比分析兩組間差異。7d后移植組實(shí)驗(yàn)兔在麻醉狀態(tài)下,用10%的甲醛行雙側(cè)腎臟灌注固定后取材,對(duì)標(biāo)本行冰凍切片并在熒光顯微鏡下觀察干細(xì)胞歸巢情況。結(jié)果：1、BM-MSCs的擴(kuò)增培養(yǎng)：3只移植組獲取骨髓,細(xì)胞接種24h后可見(jiàn)少量細(xì)胞貼壁;3-4d后可見(jiàn)細(xì)胞集落形成。5-7d可見(jiàn)細(xì)胞鋪滿(mǎn)瓶底,達(dá)到融合狀態(tài),可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。第3代以后,細(xì)胞分裂活躍,細(xì)胞形態(tài)呈成纖維狀改變,大部分呈長(zhǎng)梭狀。2、實(shí)驗(yàn)兔腎缺血再灌注損傷模型建立后,病理學(xué)觀察顯示腎小管上皮細(xì)胞均有不同程度變性、壞死。動(dòng)脈移植BM-MSCs后7d,熒光顯微鏡下可觀察到經(jīng)DAPI標(biāo)記的BM-MSCs沉積于腎組織。3、兔急性腎小管壞死模型建立前血肌酐(x±s)103.88±8.11 μmol/L,尿素氮(x±s)8.79±0.75mmol/L。模型建立后,分別于3h、24h采血觀察：血肌酐及尿素氮水平明顯倍增,分別為3h 211.75±14.52 μmol/L及18.71±1.20mmol/L；24h 339.63±26.36μmol/L及24.06±2.56mmol/L。模型建立前與模型建立后3h、24h比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.BM-MSCs移植后通過(guò)采血檢測(cè)分析,移植后3d移植組血肌酐、尿素氮水平與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。移植后第5d起移植組血肌酐、尿素氮水平均低于對(duì)照組,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。第7d動(dòng)脈組血肌酐、尿素氮分別為116.33±12.50 μ mol/L和10.13±2.78mmol/L顯著低于對(duì)照組243.67±17.21 μmol/L和17.62±1.47mmol/L,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：1、實(shí)驗(yàn)兔采用夾閉雙腎動(dòng)脈90min后恢復(fù)血流再灌注,能快速成功的建立急性缺血性再灌注損傷后急性腎小管壞死模型。2、經(jīng)動(dòng)脈內(nèi)插管灌注的BM-MSCs可向損傷腎組織歸巢,且在移植7天后DAPI仍保持熒光特性。3、BM-MSCs行動(dòng)脈內(nèi)插管早期靶向移植可以有效改善急性缺血性再灌注損傷后急性腎小管壞死腎功能的恢復(fù)。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R-332;R699.2

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1 包宇實(shí) ,解汝娟 ,那士平 ,鮑孟江;利福平導(dǎo)致急性腎小管壞死2例[J];中國(guó)醫(yī)師雜志;2001年11期

2 何平;急性蜂毒中毒致急性腎小管壞死22例臨床分析[J];航空航天醫(yī)藥;2001年04期

3 朱光煒;;同種異體腎移植術(shù)后急性腎小管壞死的早期診斷和處理[J];華夏醫(yī)學(xué);2006年01期

4 謝桐,徐琴君;急性腎小管壞死的治療[J];新醫(yī)學(xué);1983年11期

5 葉任高，，肖建平;急性腎小管壞死的治療[J];新醫(yī)學(xué);1994年03期

6 陳惠萍,曾彩虹;急性腎小管壞死[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2000年05期

7 程虹,諶貽璞;急性腎小管壞死的診斷和鑒別診斷[J];新醫(yī)學(xué);2001年02期

8 李希英,張?jiān)非?淺論急性腎小管壞死的診治[J];井岡山醫(yī)專(zhuān)學(xué)報(bào);2002年03期

9 于念之,肖蘭花,張愛(ài)平;慶大霉素致急性腎小管壞死13例臨床分析[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2002年04期

10 何威遜;急性腎小管壞死[J];小兒急救醫(yī)學(xué);2002年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 董興剛;馮健;過(guò)源;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療急性腎小管壞死實(shí)驗(yàn)研究[A];第六次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合中青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

2 單娟萍;馮春月;蔣欣欣;葉有新;;腎干細(xì)胞在鼠急性腎小管壞死的作用觀察[A];2009香港-北京-杭州內(nèi)科論壇暨2009年浙江省內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

3 趙海丹;周春華;梅長(zhǎng)林;;急性腎小管壞死患者尿液多囊蛋白-1水平變化及其臨床意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

4 劉喜紅;易著文;陳丹;何小解;莫雙紅;;胚胎后腎間充質(zhì)細(xì)胞移植對(duì)急性腎小管壞死腎功能的修復(fù)作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第三次全國(guó)兒科基層醫(yī)師學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

5 董興剛;馮健;俞志滿(mǎn);過(guò)源;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞腎動(dòng)脈導(dǎo)入在急性腎小管壞死裸鼠修復(fù)中的作用[A];第六次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合中青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

6 鄭波;;抗菌藥物所致急性腎小管壞死[A];中國(guó)毒理學(xué)會(huì)第三屆全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文（摘要）集[C];2001年

7 李保春;劉先鋒;;骨髓干細(xì)胞在小鼠腎臟缺血再灌注損傷引起的急性腎小管壞死修復(fù)中的作用[A];“中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2004年年會(huì)”暨“第二屆全國(guó)中青年腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議”論文匯編[C];2004年

8 王亮;陳衛(wèi)國(guó);王慶堂;周鵬;楊航;李曉偉;梁平;楊偉;李沙丹;劉吉文;;腎移植術(shù)后后期急性腎小管壞死3例報(bào)道[A];2012中國(guó)器官移植大會(huì)論文匯編[C];2012年

9 萬(wàn)晨旭;張金元;;川芎嗪、潑尼松和貝那普利對(duì)關(guān)木通所含馬兜鈴酸致大鼠急性腎小管壞死的保護(hù)作用比較[A];2007年浙滬兩地腎臟病學(xué)術(shù)年會(huì)資料匯編[C];2007年

10 王國(guó)殿;皮柳萍;張雪萍;;彩超對(duì)移植腎急性排異和急性腎小管壞死的應(yīng)用價(jià)值[A];2002年全國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 唐海林;超聲輻照微泡促骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)急性腎小管壞死實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

2 劉喜紅;胚胎后腎間充質(zhì)細(xì)胞移植對(duì)急性腎小管壞死再生修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2007年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 張冀云;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞動(dòng)脈靶向移植對(duì)兔急性腎小管壞死模型的治療研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2016年

2 劉先鋒;骨髓干細(xì)胞在小鼠急性腎小管壞死修復(fù)中的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

3 肖麗佳;自體骨髓源性成體干細(xì)胞移植治療急性腎小管壞死的實(shí)驗(yàn)研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2006年

4 單娟萍;腎內(nèi)源性干細(xì)胞在急性腎小管壞死修復(fù)中的作用[D];浙江大學(xué);2010年

5 黨智杰;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療急性腎小管壞死的實(shí)驗(yàn)研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2010年

6 周燕妮;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)急性腎小管壞死再生修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2010年

7 徐峰;小鼠造血干細(xì)胞移植對(duì)損傷腎組織細(xì)胞增殖的影響[D];青島大學(xué);2007年

8 薛雯;原發(fā)性腎病綜合征患者尿液及腎組織中NGAL的表達(dá)及意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號(hào)：1164875