本文關(guān)鍵詞：膀胱平滑肌細(xì)胞條件培養(yǎng)液誘導(dǎo)臍帶MSCs向平滑肌細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的探討膀胱平滑肌細(xì)胞(bladder smooth muscle cells,BSMCs)條件培養(yǎng)液能否誘導(dǎo)臍帶MSCs(umbilical cord MSCs,UCMSCs)向平滑肌細(xì)胞(smooth muscle cells,SMCs)分化,為組織工程技術(shù)應(yīng)用于泌尿系統(tǒng)修復(fù)重建尋找可供選擇的種子細(xì)胞。方法取足月新生兒臍帶和行膀胱全切術(shù)患者捐贈(zèng)的正常膀胱組織,分別分離培養(yǎng)UCMSCs和BSMCs。收集第1~5代BSMCs的培養(yǎng)液,與完全培養(yǎng)基以1∶1比例配制成BSMCs條件培養(yǎng)液。取第3代UCMSCs作為誘導(dǎo)細(xì)胞,使用BSMCs條件培養(yǎng)液培養(yǎng)為誘導(dǎo)組(A組),完全培養(yǎng)基培養(yǎng)為對(duì)照組(B組),倒置顯微鏡觀察兩組細(xì)胞形態(tài)變化;另設(shè)單純BSMCs為陽(yáng)性對(duì)照組(C組)。培養(yǎng)7、14 d,采用免疫熒光染色和Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞中α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Calpon in、平滑肌肌球蛋白重鏈(smooth muscle myosin heavy chain,SM-MHC)的表達(dá)情況。結(jié)果誘導(dǎo)培養(yǎng)后,A組細(xì)胞逐漸變長(zhǎng),由短棒狀、多個(gè)突起逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)殚L(zhǎng)梭形,與BSMCs形狀相似;B組細(xì)胞形態(tài)未見明顯變化。免疫熒光染色示,C組BSMCs中α-SMA、Calponin和SM-MHC均呈陽(yáng)性表達(dá)。培養(yǎng)7 d,A、B組可見α-SMA呈陽(yáng)性表達(dá);14 d時(shí),A組α-SMA陽(yáng)性表達(dá)逐漸增多,B組無明顯變化。培養(yǎng)7 d,A組可見Calponin陽(yáng)性表達(dá),14 d時(shí)陽(yáng)性表達(dá)明顯增多;B組各時(shí)間點(diǎn)均未見Calponin陽(yáng)性表達(dá)。各時(shí)間點(diǎn)A、B組均未見SM-MHC陽(yáng)性表達(dá)。Western blot檢測(cè)示各組細(xì)胞α-SMA、Calponin和SM-MHC蛋白表達(dá)情況與免疫熒光染色結(jié)果基本一致。結(jié)論 BSMCs條件培養(yǎng)液能誘導(dǎo)UCMSCs向SMCs分化,UCMSCs有望成為泌尿系統(tǒng)修復(fù)重建可供選擇的種子細(xì)胞之一。
【作者單位】： 四川大學(xué)華西醫(yī)院泌尿外科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30901484、81200551、81270841)~~
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 組織工程技術(shù)的發(fā)展為人類疾病治療帶來一種“理想”的治療模式[1]。干細(xì)胞具有較強(qiáng)多向分化潛能,是組織工程研究的理想種子細(xì)胞。其中MSCs是來自中胚層的干細(xì)胞,廣泛存在于骨髓、脂肪、肌肉、臍帶血、胎盤及臍帶等組織中[2-6]。目前研究較深入的是BMSCs,但存在細(xì)胞數(shù)量及增殖

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本文編號(hào)：1157252