本文關(guān)鍵詞：HCV核心蛋白對(duì)HepG2細(xì)胞增殖的影響

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【摘要】：目的利用腺病毒表達(dá)系統(tǒng),研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)核心蛋白對(duì)HepG2細(xì)胞增殖、Wnt1以及microRNA152(miR-152)表達(dá)水平的影響。方法通過HEK293細(xì)胞擴(kuò)增腺病毒獲得高滴度的Ad-EGFP和Ad-HCVcore,分別感染HepG2細(xì)胞后,通過RT-PCR和Western blot證實(shí)HCV核心蛋白在HepG2細(xì)胞中高效表達(dá)。MTT法、細(xì)胞周期測(cè)定和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HCV核心蛋白對(duì)HepG2細(xì)胞增殖的影響。SYBR探針熒光定量PCR和Western blot檢測(cè)的HepG2-HCV core細(xì)胞中Wnt1和miR-152表達(dá)的變化。用miR-152 inhibitor轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后,SYBR探針熒光定量PCR、Western blot檢測(cè)HepG2細(xì)胞中Wnt1 mRNA和蛋白表達(dá)水平變化。結(jié)果 Ad-GFP和Ad-HCV core腺病毒經(jīng)HEK293擴(kuò)增后滴度分別為1.5×109pfu/mL和1.6×1010pfu/mL。Ad-HCV core腺病毒感染HepG2細(xì)胞后,HCV核心蛋白高效表達(dá)。感染48 h后,與HepG2-Mock細(xì)胞相比,Ad-HCV core可顯著促進(jìn)HepG2細(xì)胞增殖(P0.05),加快G1/S細(xì)胞周期進(jìn)展(P0.05),并促進(jìn)細(xì)胞克隆形成(P0.05)。Ad-HCV core腺病毒感染可在顯著上調(diào)HepG2細(xì)胞中Wnt1mRNA和蛋白表達(dá)量(P0.05)的同時(shí)下調(diào)miR-152表達(dá)水平。同時(shí),miR-152 inhibitor可顯著上調(diào)Wnt1 mRNA和蛋白水平。進(jìn)一步生物信息學(xué)分析顯示,Wnt1基因mRNA 3'-UTR含有miR-152結(jié)合位點(diǎn)。結(jié)論 HCV核心蛋白可能通過抑制miR-152而減弱其對(duì)Wnt1 mRNA的降解及翻譯阻礙作用,進(jìn)而達(dá)到上調(diào)Wnt1致Wnt信號(hào)通路激活,促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖的效應(yīng)。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81071621,30973378,81101826,81272545) 重慶市自然科學(xué)基金(CSTC2009BB5257,CSTC2010BB5390) 重慶市衛(wèi)生局基金(2010-2-090) 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)科學(xué)基金(YXJJ 2009-12)~~
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是丙型肝炎的病原體。在我國HCV人群感染率約為3.2%,全球有1.7億～2.0億HCV感染者[1]。丙型肝炎仍然是嚴(yán)重威脅人類健康的重要傳染性疾病,感染者中絕大部分(70%～85%)可發(fā)展為慢性感染,在許多國家已成為引起肝細(xì)胞癌(hepatocellular carci

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4 張s，

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