本文關(guān)鍵詞：多效生長(zhǎng)因子基因轉(zhuǎn)染小鼠脂肪來(lái)源干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的探討多效生長(zhǎng)因子基因(pleiotrophin,Ptn)轉(zhuǎn)染小鼠脂肪來(lái)源干細(xì)胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)作為組織工程血管的重建種子細(xì)胞的可行性,并檢測(cè)其基因表達(dá),為缺血性病損治療提供新手段。方法取3只清潔級(jí)近交系C57BL/6W雌性小鼠(體重15～20 g)腹股溝皮下脂肪,采用酶消化法體外分離、培養(yǎng)ADSCs,流式細(xì)胞儀行細(xì)胞表面標(biāo)志物CD29、CD44鑒定。實(shí)驗(yàn)分為轉(zhuǎn)染pIRES2-LEGFPN1組(含Ptn基因編碼序列,A組)和轉(zhuǎn)染pLEGFP-N1負(fù)對(duì)照組(含GFP基因編碼序列,B組)。ADSCs轉(zhuǎn)染后,A組以最佳篩選濃度200μg/mL的G418對(duì)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞進(jìn)行篩選,流式細(xì)胞儀鑒定轉(zhuǎn)染后細(xì)胞免疫表型。實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western blot檢測(cè)A、B組細(xì)胞Ptn基因和PTN蛋白表達(dá)。結(jié)果實(shí)驗(yàn)成功分離、培養(yǎng)小鼠ADSCs;細(xì)胞表面標(biāo)志物CD29、CD44陽(yáng)性率分別達(dá)99.5%、95.8%,雙陽(yáng)性率達(dá)93.6%。A組轉(zhuǎn)染Ptn后細(xì)胞表面標(biāo)志物CD29、CD44陽(yáng)性率分別達(dá)99.1%、95.6%,雙陽(yáng)性率達(dá)93.4%。實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western blot檢測(cè)示,A組Ptn基因和PTN蛋白相對(duì)表達(dá)水平均顯著高于B組(P0.05)。結(jié)論 Ptn基因能轉(zhuǎn)染小鼠ADSCs并高表達(dá)PTN蛋白,為組織工程血管構(gòu)建種子細(xì)胞選擇提供了新思路。
【作者單位】： 成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室;四川大學(xué)華西第二醫(yī)院Alan
【基金】：四川省科技廳科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(4160220)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R329
【正文快照】： 自上世紀(jì)60年代Kleinsmith等[1]從小鼠睪丸畸胎癌中分離出胚胎干細(xì)胞以來(lái),從早期的胚胎干細(xì)胞[2]到成體干細(xì)胞[3]、核移植干細(xì)胞[4],再到近期的誘導(dǎo)干細(xì)胞[5],干細(xì)胞研究取得了很大進(jìn)展。基因修飾干細(xì)胞移植治療是近年來(lái)治療多種疾病的新方法[6]。該方法是以干細(xì)胞為載體,在

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本文編號(hào)：1155892