發(fā)布時間：2017-11-08 06:07

  本文關(guān)鍵詞：多效生長因子基因轉(zhuǎn)染小鼠脂肪來源干細胞的實驗研究

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【摘要】：目的探討多效生長因子基因(pleiotrophin,Ptn)轉(zhuǎn)染小鼠脂肪來源干細胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)作為組織工程血管的重建種子細胞的可行性,并檢測其基因表達,為缺血性病損治療提供新手段。方法取3只清潔級近交系C57BL/6W雌性小鼠(體重15～20 g)腹股溝皮下脂肪,采用酶消化法體外分離、培養(yǎng)ADSCs,流式細胞儀行細胞表面標志物CD29、CD44鑒定。實驗分為轉(zhuǎn)染pIRES2-LEGFPN1組(含Ptn基因編碼序列,A組)和轉(zhuǎn)染pLEGFP-N1負對照組(含GFP基因編碼序列,B組)。ADSCs轉(zhuǎn)染后,A組以最佳篩選濃度200μg/mL的G418對轉(zhuǎn)染后細胞進行篩選,流式細胞儀鑒定轉(zhuǎn)染后細胞免疫表型。實時熒光定量PCR、Western blot檢測A、B組細胞Ptn基因和PTN蛋白表達。結(jié)果實驗成功分離、培養(yǎng)小鼠ADSCs;細胞表面標志物CD29、CD44陽性率分別達99.5%、95.8%,雙陽性率達93.6%。A組轉(zhuǎn)染Ptn后細胞表面標志物CD29、CD44陽性率分別達99.1%、95.6%,雙陽性率達93.4%。實時熒光定量PCR、Western blot檢測示,A組Ptn基因和PTN蛋白相對表達水平均顯著高于B組(P0.05)。結(jié)論 Ptn基因能轉(zhuǎn)染小鼠ADSCs并高表達PTN蛋白,為組織工程血管構(gòu)建種子細胞選擇提供了新思路。
【作者單位】： 成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中心實驗室;四川大學(xué)華西第二醫(yī)院Alan
【基金】：四川省科技廳科技支撐計劃項目(4160220)~~
【分類號】：R329
【正文快照】： 自上世紀60年代Kleinsmith等[1]從小鼠睪丸畸胎癌中分離出胚胎干細胞以來,從早期的胚胎干細胞[2]到成體干細胞[3]、核移植干細胞[4],再到近期的誘導(dǎo)干細胞[5],干細胞研究取得了很大進展�；蛐揎椄杉毎浦仓委熓墙陙碇委煻喾N疾病的新方法[6]。該方法是以干細胞為載體,在

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本文編號：1155892