本文關(guān)鍵詞：干細(xì)胞標(biāo)志Musashi2基因RNAi腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：目的:構(gòu)建人干細(xì)胞標(biāo)志分子Musashi2(Msi2)RNAi腺病毒載體,并檢測其在膀胱癌細(xì)胞株BIU87中的干擾效果及對細(xì)胞增殖的影響。方法:將2對干擾片段msi2-1和msi2-2及陰性對照scramble片段克隆入pSES-HUS穿梭載體,經(jīng)酶切鑒定及測序后,將測序正確的克隆經(jīng)PmeⅠ酶切后與pAdeasy-1骨架質(zhì)粒在BJ5183菌內(nèi)重組,重組質(zhì)粒經(jīng)PacⅠ酶切后轉(zhuǎn)染入293A細(xì)胞,進(jìn)行腺病毒的包裝和擴(kuò)增。Real-time PCR和Western blotting法分別檢測腺病毒感染BIU87細(xì)胞后Msi2的mRNA和蛋白表達(dá)水平,MTT實(shí)驗(yàn)檢測干擾Msi2對BIU87細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果:成功將干擾片段和scramble片段克隆入pSES-HUS穿梭載體,構(gòu)建出pAdeasy-1-pSES-HUS-msi2和pAdeasy-1-pSES-HUS-scramble重組腺病毒載體并包裝擴(kuò)增出腺病毒。與scramble組比較,msi2-1和msi2-2組的Msi2mRNA和蛋白表達(dá)水平均明顯下降(P0.05)。干擾Msi2后,BIU87細(xì)胞增殖能力下降(P0.05)。結(jié)論:成功構(gòu)建Msi2RNAi腺病毒載體,其可有效抑制膀胱癌細(xì)胞株BIU87內(nèi)Msi2的表達(dá)并抑制細(xì)胞增殖。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：重慶市科學(xué)技術(shù)委員會自然科學(xué)基金資助課題(CSTC,2010BB5363)
【分類號】：R373
【正文快照】： Musashi(Msi)是干細(xì)胞自我更新和保持多潛能特性必不可少的分子,參與調(diào)節(jié)干細(xì)胞的分化發(fā)育[1]。已有研究表明:Msi在多種腫瘤中也高表達(dá),參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。Msi是1994年在果蠅的神經(jīng)系統(tǒng)研究中最早被發(fā)現(xiàn),包含2個成員:Msi1和Msi2,兩者高度同源[2]。Msi1基因在腫瘤細(xì)胞中的作

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉婷;秦國華;張建珍;馬恩波;;東亞飛蝗谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶RNA干擾效率研究[J];應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào);2011年04期

2 崔勇;陳靜;王君玉;王麒;胡國漢;駱純;盧亦成;;AKT2基因短發(fā)夾結(jié)構(gòu)RNA慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年08期

3 黃良宗;鐘科陽;王淑敏;司興奎;馬春全;顧萬軍;;RNA干擾抑制豬繁殖與呼吸綜合癥病毒N基因表達(dá)及病毒復(fù)制[J];廣東農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年11期

4 鐘翔;李興美;李偉;黃雪新;張莉莉;王恬;;腸上皮細(xì)胞RNA干擾Hsp70基因轉(zhuǎn)染條件的研究[J];生物技術(shù)通報(bào);2011年09期

5 陳妮;左國偉;潘s，

本文編號：1138727