本文關鍵詞：干細胞標志Musashi2基因RNAi腺病毒載體的構建及鑒定

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【摘要】：目的:構建人干細胞標志分子Musashi2(Msi2)RNAi腺病毒載體,并檢測其在膀胱癌細胞株BIU87中的干擾效果及對細胞增殖的影響。方法:將2對干擾片段msi2-1和msi2-2及陰性對照scramble片段克隆入pSES-HUS穿梭載體,經酶切鑒定及測序后,將測序正確的克隆經PmeⅠ酶切后與pAdeasy-1骨架質粒在BJ5183菌內重組,重組質粒經PacⅠ酶切后轉染入293A細胞,進行腺病毒的包裝和擴增。Real-time PCR和Western blotting法分別檢測腺病毒感染BIU87細胞后Msi2的mRNA和蛋白表達水平,MTT實驗檢測干擾Msi2對BIU87細胞增殖的影響。結果:成功將干擾片段和scramble片段克隆入pSES-HUS穿梭載體,構建出pAdeasy-1-pSES-HUS-msi2和pAdeasy-1-pSES-HUS-scramble重組腺病毒載體并包裝擴增出腺病毒。與scramble組比較,msi2-1和msi2-2組的Msi2mRNA和蛋白表達水平均明顯下降(P0.05)。干擾Msi2后,BIU87細胞增殖能力下降(P0.05)。結論:成功構建Msi2RNAi腺病毒載體,其可有效抑制膀胱癌細胞株BIU87內Msi2的表達并抑制細胞增殖。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學檢驗醫(yī)學院臨床檢驗診斷學教育部重點實驗室重慶市重點實驗室;
【基金】：重慶市科學技術委員會自然科學基金資助課題(CSTC,2010BB5363)
【分類號】：R373
【正文快照】： Musashi(Msi)是干細胞自我更新和保持多潛能特性必不可少的分子,參與調節(jié)干細胞的分化發(fā)育[1]。已有研究表明:Msi在多種腫瘤中也高表達,參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。Msi是1994年在果蠅的神經系統研究中最早被發(fā)現,包含2個成員:Msi1和Msi2,兩者高度同源[2]。Msi1基因在腫瘤細胞中的作

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1 劉婷;秦國華;張建珍;馬恩波;;東亞飛蝗谷胱甘肽S-轉移酶RNA干擾效率研究[J];應用昆蟲學報;2011年04期

2 崔勇;陳靜;王君玉;王麒;胡國漢;駱純;盧亦成;;AKT2基因短發(fā)夾結構RNA慢病毒載體的構建及鑒定[J];現代生物醫(yī)學進展;2011年08期

3 黃良宗;鐘科陽;王淑敏;司興奎;馬春全;顧萬軍;;RNA干擾抑制豬繁殖與呼吸綜合癥病毒N基因表達及病毒復制[J];廣東農業(yè)科學;2011年11期

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5 陳妮;左國偉;潘s，

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