本文關(guān)鍵詞：麻疹病毒HA基因克隆和表達(dá)的研究

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【摘要】：目的構(gòu)建麻疹病毒血凝素蛋白基因的重組質(zhì)粒,使其在大腸埃希菌中表達(dá)HA蛋白,為麻疹病毒診斷奠定基礎(chǔ)。方法從麻疹病毒株MV07-30中提取核糖核酸,用RT-PCR擴(kuò)增HA基因,用限制性內(nèi)切酶BamHⅠ和HindⅢ雙酶切HA基因片段和pGEM-Teasy載體,連接后獲得重組質(zhì)粒pGEM-Teasy-MVHA并克隆到大腸桿菌表達(dá)載體pET28a(+);用IPTG誘導(dǎo)重組質(zhì)粒在大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行表達(dá);利用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)技術(shù)進(jìn)行重組蛋白表達(dá)的分析;通過Ni-NTA親和層析獲得高純度目的蛋白。結(jié)果 RT-PCR獲得的HA基因片段約長1700 bp。轉(zhuǎn)化的大腸桿菌表達(dá)產(chǎn)物在SDS-PAGE中出現(xiàn)與目的蛋白分子量相一致的條帶,且重組蛋白主要以包涵體形式存在;血凝及血凝抑制實(shí)驗(yàn)顯示表達(dá)產(chǎn)物具有良好的抗原性。結(jié)論構(gòu)建麻疹病毒HA基因的原核表達(dá)體系,純化的重組蛋白可用作麻疹病毒檢測的抗原。
【作者單位】： 福州市疾病預(yù)防控制中心;福州大學(xué)生物工程與科學(xué)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 麻疹病毒 血凝素 基因克隆 原核表達(dá)
【基金】：福州市科技局(2009-S-93)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 麻疹是由麻疹病毒引起的以發(fā)熱、全身斑丘疹為特征的急性病毒性傳染病,該病傳染性強(qiáng),危害大,發(fā)病嚴(yán)重時(shí)可引起死亡,嚴(yán)重危害兒童健康。自麻疹減毒活疫苗使用以來,其發(fā)病率、死亡率大為下降,但麻疹仍是嚴(yán)重威脅兒童健康的公共衛(wèi)生問題之一。麻疹病毒(MV)是一種單股負(fù)鏈核糖核酸

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1136276