本文關(guān)鍵詞：共轉(zhuǎn)染小干擾RNA質(zhì)粒聯(lián)合抑制HeLa細(xì)胞葡萄糖-6-磷酸脫氫酶和轉(zhuǎn)酮醇酶樣基因-1表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 小干擾RNA 轉(zhuǎn)酮醇酶樣基因- 葡萄糖--磷酸脫氫酶 HeLa細(xì)胞

【摘要】：目的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)及轉(zhuǎn)酮醇酶樣基因-1(transketolase like-1,TKTL-1)是腫瘤細(xì)胞磷酸戊糖代謝途徑(pentose phosphate pathway,PPP)的2個(gè)重要關(guān)鍵調(diào)節(jié)酶。擬通過共轉(zhuǎn)染小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)表達(dá)載體同時(shí)沉默人宮頸癌Hela G6PD及TKTL-1后,觀察其對G6PD和TKTL1的聯(lián)合抑制作用,旨在探討共轉(zhuǎn)染siRNA表達(dá)載體聯(lián)合抑制PPP的效果及可行性。方法分別構(gòu)建靶向G6PD和TKTL1基因siRNA干擾質(zhì)粒載體,通過酶切和測序鑒定siRNA干擾質(zhì)粒載體構(gòu)建成功后,單獨(dú)或共轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞株,RT-PCR檢測G6PD、TKTL1 mRNA表達(dá)并結(jié)合G6PD、轉(zhuǎn)酮醇酶(transketolase,TKT)活性測定判斷并比較共轉(zhuǎn)染聯(lián)合抑制Hela細(xì)胞G6PD、TKTL1表達(dá)的效果。結(jié)果共轉(zhuǎn)染靶向G6PD和TKTL1基因的siRNA干擾載體能顯著下調(diào)G6PD和TKTL1基因表達(dá)水平[(0.96±0.05)vs(0.47±0.04),(0.98±0.05)vs(0.41±0.04),P0.01]。同時(shí),2個(gè)酶的活性也顯著下降(99.2%vs34.5%和99.8%vs 40.1%,P0.01)。共轉(zhuǎn)染抑制G6PD基因mRNA表達(dá)較單獨(dú)轉(zhuǎn)染靶向G6PD基因的siRNA干擾載體的效果有顯著下降[(0.47±0.04)vs(0.31±0.04),P0.01)]。結(jié)論共轉(zhuǎn)染siRNA干擾載體對人宮頸癌HeLa細(xì)胞PPP代謝通路進(jìn)行聯(lián)合抑制是一種有效的實(shí)驗(yàn)方案。
【作者單位】： 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【關(guān)鍵詞】： 小干擾RNA 轉(zhuǎn)酮醇酶樣基因- 葡萄糖--磷酸脫氫酶 HeLa細(xì)胞
【分類號】：R341
【正文快照】： 0引言PPP是葡萄糖旁路代謝的一條重要途徑,包括氧化和非氧化2條支路,G6PD是氧化支路的關(guān)鍵調(diào)節(jié)酶,TKT是非氧化支路的關(guān)鍵調(diào)節(jié)酶,人類基因組中轉(zhuǎn)酮醇酶基因家族包括TKT、TKTL1和TKTL2。PPP的重要產(chǎn)物5-磷酸核糖是DNA和RNA合成所必需的原料,還原型輔酶Ⅱ是體內(nèi)的主要還原當(dāng)量,

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本文編號：1136212