本文關(guān)鍵詞：大腸桿菌O157:H7異硫氰酸熒光素標(biāo)記抗體的制備及評(píng)價(jià)

  更多相關(guān)文章： 大腸桿菌O∶H 多克隆抗體 熒光免疫 異硫氰酸熒光素

【摘要】：目的:制備高效價(jià)、高純度、特異性好、熒光強(qiáng)度高及穩(wěn)定的抗大腸桿菌O157∶H7異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記抗體,初步探討其在大腸桿菌熒光免疫檢測(cè)試驗(yàn)中的應(yīng)用。方法:復(fù)蘇培養(yǎng)E.coli O157∶H7標(biāo)準(zhǔn)菌株,甲醛滅活制備疫苗免疫家兔。4次免疫后,頸動(dòng)脈采血分離血清,經(jīng)辛酸-飽和硫酸銨法粗提后應(yīng)用蛋白親和層析柱HiTrap Protein G HP進(jìn)行IgG純化,借助SDS-PAGE電泳、BCA試劑盒法、間接ELISA法分別對(duì)蛋白純度、蛋白含量及抗體效價(jià)進(jìn)行測(cè)定。應(yīng)用不同F(xiàn)ITC與蛋白量比值以及不同標(biāo)記反應(yīng)條件對(duì)多克隆抗體進(jìn)行標(biāo)記。比較熒光抗體F485/535,結(jié)合差異性顯著分析對(duì)FITC與蛋白量比值及反應(yīng)條件進(jìn)行合理選擇,應(yīng)用標(biāo)記抗體與E.coli O157∶H7和金黃色葡萄球菌混合菌液反應(yīng)驗(yàn)證標(biāo)記效果。結(jié)果:HiTrap Protein G進(jìn)行E.coli O157∶H7多克隆抗體純化的最佳純化方法為35%、100%二梯度洗脫,制備抗體效價(jià)為1∶25 600,與沙門氏菌、陰溝腸桿菌等8種腸桿菌無交叉反應(yīng),最佳FITC與蛋白量比值為1∶10,最佳標(biāo)記反應(yīng)條件為20℃、2h。由最佳條件制得的熒光抗體與E.coli O157∶H7反應(yīng)明顯,強(qiáng)熒光連續(xù)照射15min后仍顯示高亮度熒光反應(yīng),且不與金黃色葡萄球菌反應(yīng)。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)首次制備出純度高、熒光強(qiáng)度高、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)的E.coliO157:H7FITC標(biāo)記多克隆抗體,為E.coli O157:H7熒光免疫檢測(cè)方法的建立完成了關(guān)鍵步驟。
【作者單位】： 吉林大學(xué)軍需科技學(xué)院食品質(zhì)量與安全教研室;吉林大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院衛(wèi)生檢驗(yàn)教研室;吉林出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心;
【關(guān)鍵詞】： 大腸桿菌O∶H 多克隆抗體 熒光免疫 異硫氰酸熒光素
【基金】：國(guó)家質(zhì)檢總局科技項(xiàng)目資助課題(2010IK018)
【分類號(hào)】：R378
【正文快照】： O157∶H7是大腸桿菌中重要血清型,其感染劑量極低,一次攝入10個(gè)活菌就可致病[1]。因此,做好食品中E.coli O157∶H7的檢測(cè)具有重要的意義。微生物檢測(cè)方法很多,包括細(xì)菌培養(yǎng)法、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法及酶聯(lián)免疫吸附法等,但均有不足之處[2-5]。免疫熒光技術(shù)(immunof1uorescence

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1130173